脂蛋白脂酶(LPL活性测定试剂盒，高灵敏度，快速定量分析

摘要：甘油三酯（TAG）是血液中的一种脂质，作为能量来源，并在代谢中发挥关键作用。甘油三酯是消化过程中分解膳食脂肪的最终产物。任何未被立即使用的多余碳水化合物和脂肪都会化学转化为甘油三酯。在肠道中，分泌的酶脂肪酶水解甘油三酯的酯键，产生甘油和游离脂肪酸，这一过程称为

甘油三酯（TAG）是血液中的一种脂质，作为能量来源，并在代谢中发挥关键作用。甘油三酯是消化过程中分解膳食脂肪的最终产物。任何未被立即使用的多余碳水化合物和脂肪都会化学转化为甘油三酯。在肠道中，分泌的酶脂肪酶水解甘油三酯的酯键，产生甘油和游离脂肪酸，这一过程称为脂肪分解。肠上皮细胞随后吸收并重新包装这些片段，并与胆固醇结合形成乳糜微粒，一种主要的脂蛋白运输颗粒。在肝脏中，肝脂肪酶也会分解甘油三酯，以从甘油三酯、胆固醇和载脂蛋白中组装另一种脂蛋白颗粒（VLDL）。血浆甘油三酯水平通过VLDL和乳糜微粒颗粒的组装和降解来调节。脂蛋白脂肪酶（LPL）是负责水解这些颗粒中甘油三酯核心的关键血浆脂肪酶。

艾美捷脂蛋白脂酶(LPL)活性测定试剂盒（#STA-610）利用一种荧光甘油三酯类似物作为脂肪酶底物。当未被水解时，底物保持在非荧光、猝灭状态；然而，当在sn-1位置被LPL水解时，会产生一种可被荧光微孔板读取器测量的荧光产物（激发波长480-485纳米/发射波长515-525纳米，建议截止波长495纳米）（见测定原理）。脂蛋白脂肪酶（LPL）活性测定试剂盒是一种简单的荧光测定法，可在96孔微孔板格式中定量测量血浆、血清和裂解液中的LPL活性。每套试剂盒提供的试剂足以进行多达100次测定，包括空白、LPL标准品和未知样本。试剂盒包含LPL标准品，检测灵敏度限为约1毫单位/毫升（见试剂盒组成中的单位定义）。除了LPL，该测定还可用于检测内皮脂肪酶和肝脂肪酶活性。

相关产品：

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5. STA-399：游离甘油测定试剂盒（荧光法）

脂蛋白脂酶(LPL)活性测定试剂盒组成（干冰运输）：

1. LPL荧光底物（部件编号261001）：一个20微升琥珀色试管。

2. 10倍LPL测定缓冲液（部件编号261002）：两个1.5毫升试管。

注意：该缓冲液不含钙或镁。

3. 终止液（部件编号261003）：两个1.5毫升试管。

4. LPL酶标准品（部件编号261004）：一个25微升试管，浓度为2500单位/毫升。

注意：一个单位对应于在pH 8.0和40摄氏度下，使用三油酸甘油酯作为底物时，每分钟释放1微摩尔油酸的酶量。

未提供的材料：

1. 标准96孔荧光黑色微孔板

2. 37摄氏度培养箱

3. 配备激发滤光片（480-485纳米）和发射滤光片（515-525纳米）的荧光微孔板读取器（建议截止波长495纳米）

储存条件：

将整个试剂盒储存于-80摄氏度。通过分装避免反复冻融。LPL荧光底物对光敏感，应保存在琥珀色试管中。

试剂准备：

- 1倍LPL测定缓冲液：用去离子水将10倍LPL测定缓冲液稀释至1倍。搅拌至均匀。

- LPL荧光底物：在测定准备期间，将LPL荧光底物在室温下解冻。使用前，用1倍LPL测定缓冲液将LPL荧光底物稀释1:500。短暂涡旋至均匀。不要储存稀释后的溶液。

注意：对于长期储存，LPL荧光底物应分装并冷冻于-80摄氏度，以避免反复冻融。

- 终止液：在37摄氏度下解冻终止液。对于长期储存，终止液可在室温或4摄氏度下保存。如果出现结晶，可在37摄氏度下短暂加热溶液以重新溶解。

样本准备：

- 血浆：用抗凝剂（如肝素、柠檬酸盐或EDTA）收集血液，并通过倒置混合。在4摄氏度下以1000×g离心10分钟。收集血浆上清液，避免干扰白色白细胞层。样本应立即检测或在-80摄氏度下冷冻保存，最长可达1个月。在测定前，血浆必须用1倍LPL测定缓冲液稀释1:50至1:200。

- 血清：在无抗凝剂的试管中收集血液。让血液在室温下凝固30分钟。以2500×g离心20分钟。小心移除黄色血清上清液，避免干扰白色白细胞层。样本应立即检测或在-80摄氏度下冷冻保存，最长可达1个月。在测定前，血清必须用1倍LPL测定缓冲液稀释1:50至1:200。

- 细胞裂解液：通过以1000×g离心10分钟收集10×10⁶个细胞。弃去上清液，用1毫升冷20毫摩尔/升Tris（pH 7.5）、150毫摩尔/升氯化钠重悬细胞。匀浆或超声处理细胞悬浮液。在4摄氏度下以10,000×g离心10分钟。小心收集上清液，置于冰上以供即时使用。对于长期储存，将裂解液在-80摄氏度下冷冻保存，最长可达1个月。在测定前，细胞裂解液必须用1倍LPL测定缓冲液进一步稀释1:20或更高。

- 组织样本：称取200毫克组织并切成小块。用冷PBS冲洗组织以去除红细胞和血块。在1毫升冷20毫摩尔/升Tris（pH 7.5）、150毫摩尔/升氯化钠中匀浆处理切碎的组织。在4摄氏度下以10,000×g离心10分钟。小心收集上清液，置于冰上以供即时使用。对于长期储存，将匀浆在-80摄氏度下冷冻保存，最长可达1个月。在测定前，细胞裂解液必须用1倍LPL测定缓冲液进一步稀释1:100或更高。

结果示例：

下图展示了典型的LPL活性测定试剂盒结果。使用SpectraMax Gemini XS荧光光度计（Molecular Devices）在485/525纳米滤光片组和495纳米截止波长下进行荧光测量。以下数据仅供参考，不应用于解释实际结果。