β-羟基丁酸测定试剂盒，简单、灵敏的BHB含量测定方法

摘要：β-羟基丁酸（BHB）是一种在长时间禁食、低碳水化合物摄入或剧烈运动期间产生的酮体。作为能量代谢和燃料利用中的关键参与者，BHB在葡萄糖供应受限时，为大脑、心脏和骨骼肌等多种组织提供替代能量来源。BHB还作为一种信号分子，影响基因表达、氧化应激、炎症和其他细胞

β-羟基丁酸（BHB）是一种在长时间禁食、低碳水化合物摄入或剧烈运动期间产生的酮体。作为能量代谢和燃料利用中的关键参与者，BHB在葡萄糖供应受限时，为大脑、心脏和骨骼肌等多种组织提供替代能量来源。BHB还作为一种信号分子，影响基因表达、氧化应激、炎症和其他细胞过程。其代谢意义不仅限于能量供应，还涉及多种生理和病理过程。AkrivisBio的BHB检测试剂盒是一种简单、灵敏的BHB含量测定方法。在检测中，BHB被氧化生成NADH，随后NADH用于将四氮杂卓还原为具有450纳米吸收峰的高色素甲臜。该检测的灵敏度适用于测量低至10微摩尔的BHB样本。

艾美捷β-羟基丁酸测定试剂盒：

货号：MA-0132

规格：100孔

样本类型：血清、血浆、细胞裂解液、组织提取液、尿液、细胞培养基

适用物种：通用（适用于所有物种）

检测方法：比色法，检测波长405纳米

检测类型：定量

应用：基于微孔板的比色法检测，用于定量检测广泛样本中的胰蛋白酶活性。

灵敏度：0.05-0.1mU

储存条件：4°C

运输条件：凝胶冷藏包

β-羟基丁酸测定试剂盒检测组分：

-检测缓冲液：25毫升，货号WMMA-0132-A

-β-羟基丁酸脱氢酶：冻干粉，绿色，货号MA-0132-B

-NAD/四氮杂卓混合液：冻干粉，红色，货号MA-0132-C

-β-羟基丁酸标准品：冻干粉，黄色，货号MA-0132-D

β-羟基丁酸测定试剂盒检测原理：

1.β-羟基丁酸脱氢酶将BHB氧化为乙酰乙酸，生成NADH。

2.NADH将电子转移至四氮杂卓，将其转化为甲臜。

储存和处理：

在使用前将试剂盒储存于-20°C。使用前将检测组分恢复至室温。打开试剂瓶前请短暂离心。

-检测缓冲液：直接使用，储存于4°C。

-β-羟基丁酸脱氢酶：用220微升检测缓冲液溶解。使用时保持在冰上，储存于-20°C。

-NAD/四氮杂卓混合液：用220微升检测缓冲液溶解，储存于-20°C。

-β-HB标准品：用100微升去离子水溶解，配制成10mM的溶液，储存于-20°C。

检测步骤：

1.标准曲线制备：将10微升标准品转移至90微升去离子水中，配制成0.4mM的工作溶液。将0、5、10、15、20、25微升的工作溶液分别转移至96孔板的多个孔中，用检测缓冲液将所有孔的体积调整至50微升，得到每孔0、2、4、6、8、10纳摩尔的BHB标准系列。

2.样本准备：体液中的β-HB含量差异较大（血清中为20微摩尔-5毫摩尔），尿液中可能更高。血液和尿液中的还原物质可能会干扰检测。使用10kDa离心过滤器可以减少这种干扰。向测试孔中加入1-50微升样本，用检测缓冲液将所有孔的体积调整至50微升。

-注意事项：

-还原物质和其他所谓的基质效应可以轻松处理。请参阅下一页，了解处理显著干扰检测的方法。

-在极少数情况下，样本中存在还原型吡啶核苷酸NAD(P)H，可能会干扰检测。在这种情况下，运行一个背景对照，用2微升检测缓冲液代替β-HB脱氢酶。从配对样本中减去这个背景值，以获得校正后的β-HB读数。

-所有样本读数必须在标准曲线范围内。如果读数超出此范围，请稀释样本并重新运行。

3.启动反应：每个反应需要50微升反应混合液。根据要运行的总孔数准备足够的反应混合液：

-反应混合液：

-检测缓冲液：46微升

-β-HB脱氢酶：2微升

-NAD/四氮杂卓混合液：2微升

-背景对照混合液：

-检测缓冲液：48微升

-NAD/四氮杂卓混合液：2微升

-向含有β-HB标准品或样本的每个孔中加入50微升反应混合液。

4.测量：在450纳米处监测反应30分钟。标准品会迅速显色，但样本的显色可能会更慢。

5.计算：

-从所有标准品读数中减去0BHB标准品的读数。绘制背景校正后的标准曲线。

-确定标准曲线的斜率，这将用于定义未知样本中的BHB含量。通过从配对样本中减去任何背景对照来校正未知样本。将校正后的样本读数除以标准曲线的斜率，以获得样本孔中的BHB纳摩尔数。

-将这些值转换回原始样本中的BHB含量：

-A.孔中的BHB纳摩尔数/加入孔中的样本微升数=样本中的BHB纳摩尔数/微升

-B.样本中的BHB纳摩尔数/微升×样本体积=样本中的总BHB纳摩尔数

-C.如果样本因信号过高而稀释，请乘以稀释因子。

-注意：许多代谢物和其他化学物质可能会显著干扰各种反应化学。为了更精确的测定，请在有无恒定量样本的情况下进行标准曲线测定。不必运行所有六个标准品；至少使用3个（0-10-20微升）来验证吸光度响应与分析物量呈线性关系。两条标准曲线的斜率应相同。它们之间的吸光度偏差归因于样本中的分析物量（在本例中为β-羟基丁酸）。如果两个斜率不同，则存在基质效应影响反应化学。在这种情况下，确定0标准品之间的吸光度差异，并将其应用于在样本存在下运行的标准曲线的斜率。

具有大矩阵效应的样品示例：