瑞孚迪均相技术平台赋能分子相互作用与降解效能的高精度检测

摘要：PROTAC技术近年来发展迅速，在解决传统"不可成药"靶点、克服临床耐药及提高靶向选择性方面展现出巨大潜力。虽然目前尚未有PROTAC疗法正式上市，但超过25种PROTAC候选药物正处于临床试验阶段，其应用范围包括血液系统恶性肿瘤、实体瘤和自身免疫性疾病等。然

PROTAC技术近年来发展迅速，在解决传统"不可成药"靶点、克服临床耐药及提高靶向选择性方面展现出巨大潜力。虽然目前尚未有PROTAC疗法正式上市，但超过25种PROTAC候选药物正处于临床试验阶段，其应用范围包括血液系统恶性肿瘤、实体瘤和自身免疫性疾病等。然而，PROTAC分子的复杂作用机制也给检测和筛选带来了巨大挑战。正是在这样的背景下，瑞孚迪（Revvity）公司推出的HTRF（均相时间分辨荧光）和Alpha（Amplified Luminescent Proximity Homogeneous Assay）技术强强联合，为PROTAC研发提供了全方位的检测解决方案。

PROTAC检测特殊挑战

PROTAC分子的功能依赖于其诱导靶蛋白与E3连接酶形成三元复合物，进而触发泛素-蛋白酶体降解途径，因此其活性评估需综合考察二元结合、三元复合物形成、泛素化效率及降解动力学等多个维度。传统检测方法在此背景下显现出明显局限性：

为全面评估PROTAC活性，现代检测技术需满足以下要求：

检测二元和三元相互作用定量分析蛋白降解动力学适应高通量筛选需求

均相技术平台独特优势

瑞孚迪的HTRF和Alpha技术均采用均相检测格式，无需分离步骤即可直接测量溶液中的生物分子相互作用，这一特性使它们在PROTAC研究中具有独特价值：

01高效、无需洗涤的检测流程

采用 “Add-Read” 的均相工作模式，彻底摒弃了ELISA、Western Blot所需的繁琐步骤以及HiBiT技术需要前期构建细胞株的情况，极大简化了实验操作，提高了检测效率，特别适合高通量筛选。

2出色的灵敏度和稳定性

HTRF技术基于时间分辨荧光原理，有效消除背景干扰；Alpha技术基于微珠的化学放大机制，可检测皮摩尔级别的微弱相互作用，相较于SPR技术，这些均相方法在检测低亲和力的蛋白相互作用和复杂的三元复合物方面表现出显著的灵敏度优势，能够有效解决SPR在此类应用中信号响应不足的局限性。

3平台通用性高，一技多用

仅需一种均相技术平台，即可无缝评估PROTAC功能的三个核心指标：二元结合亲和力、三元复合物形成效率与靶蛋白降解水平。这种集成化能力打破了传统方法（如SPR、ELISA、Western Blot分别用于不同指标）的壁垒，确保了数据的一致性和可比性，极大简化了实验流程并加速了研发进程。

覆盖PROTAC研发全流程

二元相互作用：奠定PROTAC功能的分子基础

PROTAC分子的功能基础是其同时与靶蛋白和E3连接酶的结合能力。瑞孚迪的均相技术在此环节展现出独特优势，使研究人员能够研究分子相互作用，无需分离洗涤步骤，最大程度保持了相互作用的真实性。

HTRF Cereblon binding kit检测原理图（左）和数据（右）

三元复合物形成：解锁PROTAC机制的关键步骤

PROTAC技术的核心在于其能否有效介导并稳定靶蛋白与E3连接酶之间的相互作用，形成三元复合物。瑞孚迪的Toolbox试剂盒通过双抗体识别策略，可特异性、高通量的检测三元复合物的组装效率与稳定性。

HTRF BTK-WT/CRBN PROTAC binding kit检测原理图（左）和数据（右）

目标蛋白降解动力学：评估PROTAC的最终功效

蛋白降解是PROTAC功能的终极体现，也是评价其效能的黄金标准。瑞孚迪的蛋白检测试剂盒无需基因工程标记，即可直接在天然细胞体系中定量分析蛋白降解过程，准确计算DC50、Dmax等关键参数。该无标记优势使其能够应用于原代细胞和组织样本检测，为PROTAC研究提供更接近生理环境的药效学数据。细胞消化太耗时? TryPLUS消化液免终止、免冷冻，随取随用，一步搞定!