摘要：烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 (Nicotinamide adenine dinucleotide, NAD) 是所有细胞中都存在的一种辅酶，包括 NAD+（氧化型）和 NADH（还原型）两种形式。NAD+ 既是氧化还原反应过程中传递电子的辅酶，又可以作为很多酶的底物
烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 (Nicotinamide adenine dinucleotide, NAD) 是所有细胞中都存在的一种辅酶，包括 NAD+（氧化型）和 NADH（还原型）两种形式。NAD+ 既是氧化还原反应过程中传递电子的辅酶，又可以作为很多酶的底物来参与细胞内反应。NAD+ 在细胞和体内发挥着重要的功能，其合成和降解及其产物参与细胞凋亡、代谢调控和基因表达的调控等，NAD+ 的减少是细胞死亡的主要因素之一。NAD+ 在调节细胞氧化还原状态方面的重要性以及调控信号通路及转录方面的功能，使得 NAD+ 及其合成和消耗的酶成为多种疾病的潜在药物靶点。传统的 NAD+/NADH 和 NADP+/NADPH 测定是通过检测 340 nm 处的吸收来完成的，该方法灵敏度低且易受干扰。NAD/NADH 检测试剂盒是一种基于 WST-8 的显色反应，通过比色法来检测细胞、组织或其它样品中 NAD+（氧化型辅酶 Ⅰ）和 NADH（还原型辅酶 Ⅰ）各自的量、比值和总量的检测试剂盒。NAD/NADH 检测试剂盒能特异性地检测 NAD+ 和 NADH，而不检测 NADP+ 和 NADPH，在反应过程中 NAD+ 被还原为 NADH，NADH 将 WST-8 还原成橙黄色 Formazan（甲臜），在 450 nm 左右有最大吸收峰。反应体系中生成的 Formazan 与样品中 NAD+ 或 NADH 的总量成比例关系。本试剂盒可检测 0.1~10 μM NAD+ 或 NADH。
NAD/NADH 检测试剂盒中的荧光染料凭借高特异性、低干扰等优势，解决了传统吸光值检测法的诸多弊端，适配多场景检测需求，其核心优势如下：
特异性强，干扰极低：大多依托乳酸脱氢酶循环反应等特异性酶促反应设计，仅针对性响应 NAD/NADH，对结构相似的 NADP+/NADPH 干扰低于 1%，能精准区分目标物质与其他类似辅酶。同时部分试剂盒采用红色或近红外荧光发射，避开了生物样本自身在紫外区的背景干扰，相比传统 340nm 紫外吸光值检测法，无需担忧杂散光和样本基质的干扰问题。灵敏度高，检测范围广：搭配酶促循环反应可放大荧光信号，显著提升检测灵敏度。例如部分试剂盒检测下限低至 0.02μM，能精准捕捉细胞内 NAD/NADH 的微量波动；还有近红外荧光探针检测限可达 43nM，适配低浓度样本检测。且检测区间覆盖 0.02 - 1μM 等较宽范围，既能满足正常生理状态下的基础检测，也能应对病理或应激状态下的浓度异常变化检测。操作便捷，适配高通量实验：无需对样本中的 NAD/NADH 进行复杂纯化处理，多数仅需添加单一工作试剂，经 10 - 15 分钟孵育即可完成检测。同时适配 96 孔板、384 孔板等格式，可融入自动化检测系统，每天能处理数千份样本，大幅提升药物筛选、大规模样本代谢分析等场景的实验效率。适配多场景成像与动态监测：部分荧光染料如 CY5 标记探针、近红外探针，不仅能穿透血脑屏障，适配肝脏、肌肉等深部组织及脑部的代谢成像，还可用于斑马鱼、小鼠等模式生物的相关检测。且荧光信号与 NADH/NAD + 比值呈正相关，在生理温度范围内信号变化可逆，可实时追踪细胞代谢过程中 NAD/NADH 的动态波动，为线粒体功能、酶活性等研究提供实时数据。细胞兼容性好，保障实验可靠性：检测过程无需使用苯酚、氯仿等有毒试剂，也无需乙醇沉淀等损伤细胞的步骤，对细胞毒性低。适配活细胞、细胞提取物等多种样本，流式细胞仪、荧光显微镜等常规设备均可检测，既能满足细胞层面的批量分析，也能支撑精细的成像观察需求。NAD/NADH 检测试剂盒的荧光染料因精准检测 NAD+/NADH 水平及比值、适配多场景，广泛应用于代谢研究、疾病机制探究等多个科研领域，核心应用如下：
细胞代谢与线粒体功能研究检测糖酵解、三羧酸循环等代谢通路中 NAD+/NADH 的动态变化，评估细胞代谢模式转换。
探究线粒体呼吸链功能异常时 NAD+/NADH 比值的改变，为线粒体相关疾病机制研究提供依据。
疾病机制与病理研究肿瘤研究：分析肿瘤细胞（如 Warburg 效应相关肿瘤）中 NAD+/NADH 的异常表达，及其在肿瘤增殖作用。
代谢性疾病：研究糖尿病、肥胖等疾病中，组织细胞 NAD 代谢紊乱与胰岛素抵抗、糖脂代谢异常的关联。
神经退行性疾病：检测阿尔茨海默病、帕金森病模型中，NAD+/NADH 失衡引发的氧化应激与神经细胞损伤机制。
衰老与再生医学研究检测衰老细胞、组织中 NAD + 水平的下降趋势，探究 NAD 代谢与衰老进程的关联。
评估抗衰老干预措施对 NAD+/NADH 比值的改善效果，为再生医学研究提供数据支撑。
微生物与环境生物学研究检测细菌、真菌等微生物在不同营养条件或环境胁迫下的 NAD 代谢状态，分析其适应机制。
评估环境污染物（如重金属、农药）对生物体内 NAD 代谢的干扰，为生态毒理学评价提供依据。
本文引用地址：https://www.med-life.cn/product/1296420.html
来源：科学小黄花