摘要：Dilinoleyl DiI 细胞膜荧光探针（橙红色）与 DiI 有相同的吸收和发射波长。由于 Dilinoleyl DiI 细胞膜荧光探针（橙红色） 中含有不饱和烃链，使 Dilinoleyl DiI 细胞膜荧光探针（橙红色） 比 DiI 在细胞膜上的横向扩

Dilinoleyl DiI 细胞膜荧光探针（橙红色）与 DiI 有相同的吸收和发射波长。由于 Dilinoleyl DiI 细胞膜荧光探针（橙红色） 中含有不饱和烃链，使 Dilinoleyl DiI 细胞膜荧光探针（橙红色） 比 DiI 在细胞膜上的横向扩散速度更快。正是由于其这个特性，使其广泛应用于神经元组织的追踪。

Dilinoleyl DiI 细胞膜荧光探针（橙红色） 染色后可进行多聚甲醛（不可使用甲醇等其他试剂）的固定，但不建议在染色后进行透化。

以每次使用 100 μL 染色工作液，染色工作液浓度 10 μM 计算，5 mg 配置为工作液大概可以用5400 次。

一、细胞膜标记的高适配性与特异性

不饱和长链设计，适配膜流动性

Dilinoleyl DiI 的两条疏水链为亚油酰基（含 2 个不饱和双键），而非传统 DiI 的饱和硬脂酰基。这种不饱和结构使其更易嵌入高流动性细胞膜区域（如脂筏、活细胞的动态膜结构），与膜脂质双分子层的兼容性更强，标记后不易因膜流动导致聚集（聚集率＜2%，传统 DiI 约 5%）。

标记后呈现均匀的橙红色荧光膜环，无 “斑块状” 非特异性聚集，可清晰分辨膜细微结构（如细胞的微绒毛、突触前膜的膜褶皱），尤其适合高流动性膜样本（如红细胞膜、神经元轴突膜）。

低内吞率，膜结合持久稳定

疏水链与膜脂质的相互作用更强，内吞率极低（＜0.5%/ 小时），远低于传统 DiI（＜1%/ 小时）与 DiO（＜5%/ 小时），荧光信号可在活细胞中维持 48-72 小时，即使细胞经历多次分裂或迁移，膜荧光仍能均匀分配，无明显信号衰减。

二、橙红色荧光的光谱优势与多场景适配

低干扰，穿透性与亮度双优

激发 / 发射波长约 550/566 nm，与传统 DiI 接近，可直接使用荧光显微镜的 TRITC 通道（546 nm 激发）或流式细胞仪的黄激光通道（561 nm 激发），无需特殊仪器。

橙红色荧光亮度比传统 DiI 高约 15%，且远离细胞自发荧光（蓝色 / 绿色），在富含脂褐素的细胞（如衰老细胞）或厚组织切片中，信噪比提升约 30%，穿透深度可达 40-60 μm（传统 DiI 约 30-50 μm），适合 3D 细胞球、肿瘤类器官的深层膜成像。

多色实验兼容性强，无串扰

与绿色（FITC、GFP）、远红外（Cy5、APC）探针联用无光谱重叠，串扰率＜1.5%，可构建多维检测体系：

Dilinoleyl DiI（细胞膜）+ FITC - 脂筏标记物（如 CTxB）：同步观察膜整体结构与脂筏分布；

流式实验中，可与 PE-CD4（免疫表型）、7-AAD（细胞活性）同时检测，实现 “膜标记 + 免疫分型 + 活性分析”，细胞群分群清晰度优于传统 DiI。

三、活细胞动态研究与低毒性优势

适配膜流动性分析，功能研究更精准

不饱和长链对膜流动性变化更敏感：当膜流动性升高（如加入胆固醇抑制剂）时，Dilinoleyl DiI 的荧光偏振度降低更显著（变化幅度比传统 DiI 高 20%）；膜流动性降低（如低温处理）时，偏振度升高更明显，可通过荧光偏振仪精准量化膜流动性差异，为脂筏功能、药物对膜的影响等研究提供更精准的数据。

低毒性，支持长时程动态观察

工作浓度（0.5-3 μM）下对细胞活性影响极小（如 HUVEC 细胞存活率＞98%，神经元轴突生长速度正常），远低于传统 DiI（1-5 μM）。低浓度即可实现高亮度标记，避免高浓度染料对膜结构的干扰（如膜流动性异常）。

可用于 72 小时以上的长时程动态追踪（如细胞融合的膜混合过程、肿瘤细胞侵袭的伪足膜动态），荧光信号随膜行为同步变化，无滞后或脱附现象。

四、典型应用场景

细胞膜流动性与脂筏研究

脂筏功能分析：Dilinoleyl DiI 标记细胞膜，结合 FITC-CTxB（脂筏特异性探针），通过荧光共定位观察脂筏分布，同时用荧光偏振仪量化脂筏区域与非脂筏区域的膜流动性差异；

药物影响评估：检测降脂药（如他汀类）对细胞膜流动性的调节作用，Dilinoleyl DiI 的偏振度变化可直观反映药物效果，比传统 DiI 更灵敏。

活细胞长时程示踪

胚胎发育：标记斑马鱼胚胎的生殖细胞，追踪其在胚胎发育过程中的迁移路径（如从生殖嵴向性腺的迁移），48 小时内膜荧光仍清晰，无信号丢失；

肿瘤侵袭：标记肿瘤细胞后接种于 3D 基质胶，观察其侵袭过程中的膜动态（如伪足伸展、膜褶皱变化），荧光随侵袭行为同步延伸，可量化侵袭速率。

高流动性膜样本标记

红细胞膜研究：标记红细胞膜，观察其在渗透压变化下的形态转变（如正常形态→球形→锯齿形），Dilinoleyl DiI 均匀分布于膜表面，无聚集，清晰反映膜形态变化；

神经元突触动态：标记神经元轴突膜，观察突触形成过程中的膜扩展与回缩，配合突触素 - GFP，定位突触前膜与膜动态的关联。

五、技术优化与注意事项

染色浓度控制：活细胞推荐 0.5-3 μM，高浓度（＞5 μM）可能导致膜荧光饱和，影响偏振度检测；

膜流动性实验条件：荧光偏振检测需在 25-37℃恒温环境下进行，避免温度波动干扰膜流动性；

长时程成像保护：使用含抗氧化剂的培养基（如添加维生素 E），减少染料氧化导致的荧光衰减，延长信号维持时间至 72 小时以上。

总结

Dilinoleyl DiI 通过 “不饱和长链 + 高亮度橙红色荧光” 的设计，在细胞膜标记中实现了 “高流动性适配 + 长时程稳定 + 精准功能量化” 的三重优势，尤其适合高流动性膜结构研究、膜流动性量化分析及超长时程细胞示踪。相比传统 DiI，其对膜动态环境的适配性更强，为膜生物学、药理学研究提供了更精准的工具。

来源：小凡的科学世界