摘要：Signal-Seeker™ 产品系列的开发旨在让专业人士和非专业人士都能轻松分析关键调控蛋白的修饰。全面的 Signal-Seeker™ 试剂盒提供了一种亲和珠子系统，用于从任何给定的细胞或组织裂解液中分离和富集修饰蛋白。随后，通过标准的 Western b

Signal-Seeker™ 产品系列的开发旨在让专业人士和非专业人士都能轻松分析关键调控蛋白的修饰。全面的 Signal-Seeker™ 试剂盒提供了一种亲和珠子系统，用于从任何给定的细胞或组织裂解液中分离和富集修饰蛋白。随后，通过标准的 Western blot 程序，使用针对目标蛋白的一抗来分析富集的蛋白群体。

艾美捷Signal-Seeker 泛素化富集试剂盒(30次检测)（#BK161）用途包括：

研究瞬时调控机制

测量多条信号通路成员蛋白的信号事件

发现目标蛋白的新修饰

洞察调控机制

测量内源性或瞬时表达蛋白的信号事件

实验结果示例：

这些试剂盒有多种应用（见下一部分），这里我们描述了一个关于 Rac1 蛋白的有趣应用：

应用 1：研究高度瞬时的调控事件

Rho 家族蛋白（包括 Rac1）的活性已知部分通过泛素化（也称为泛素化修饰）事件进行调控，这些事件可以通过修饰蛋白的降解和/或定位来调节信号通路（Visvikis, O. 等人，2010. Biol. Cell 102: 377-389；Nethe, M. 和 Hordijik, P. 2010. J. Cell Sci. 123: 4011-4018）。在许多情况下，Rac1 的 GTP 结合活性形式是泛素化的首选底物。例如，研究表明，用细菌毒素 CNF1 处理的细胞会导致 Rac1 的持续激活以及随后的单泛素化和多泛素化（Pop, M. 等人，2004. J. Biol. Chem. 279: 35840-35848）。

使用 Signal-Seeker™ 泛素化检测试剂盒（货号：BK161），我们检测了用 CNF1 毒素（货号：CN04）处理的 3T3 细胞中内源性 Rac1 的泛素化，并发现在 300 µg 的 3T3 细胞裂解液中可以检测到 Rac1 的单泛素化和多泛素化。该试剂盒提供了一种用户友好的工具，用于检测任何目标蛋白的单泛素化和多泛素化。

图 1：Swiss 3T3 细胞预先用 MG-132 处理，然后未处理或用 CNF1（CN04）处理 3 小时，随后用 BlastR 缓冲液裂解。利用 BK161 试剂盒对每种条件的 300 µg 裂解液进行免疫沉淀（IP）。泳道 1：3 µg 未处理裂解液输入；泳道 2：泛素亲和珠子（UBA01）+ 未处理裂解液；泳道 3：UBA01 + CN04 处理的裂解液；泳道 4：泛素对照珠子（CUB02）+ 未处理裂解液；泳道 5：CUB02 + CN04 处理的裂解液。使用抗 Rac1 抗体检测 Rac1 的泛素化。

在这一研究领域可以尝试的其他实验包括：

泛素化酶或去泛素化酶在 Rac1 单泛素化和多泛素化中的药理学研究

在多种不同的生长因子或药物处理下，研究 Rac1 激活与泛素化之间的关系

检测泛素化 Rac1 与效应蛋白的相互作用

检测泛素化 Rac1 与其他 Rac1 调控性翻译后修饰（PTMs）之间的相互作用

Signal-Seeker™ 磷酸酪氨酸检测试剂盒（货号：BK160）

Signal-Seeker™ 泛素亲和珠子（货号：UBA01B-beads）

来源：老周讲科学