摘要：使用腺病毒将遗传物质引入宿主细胞具有诸多优势。其允许的宿主细胞范围非常广泛。该病毒已被用于感染许多哺乳动物细胞类型（包括增殖性和非增殖性细胞），以实现重组蛋白的高效表达。重组腺病毒尤其适用于那些通过脂质体转染效率较低的细胞系中的基因转移和蛋白表达。病毒进入细胞
重组腺病毒在研究和治疗应用中具有巨大的潜力。
使用腺病毒将遗传物质引入宿主细胞具有诸多优势。其允许的宿主细胞范围非常广泛。该病毒已被用于感染许多哺乳动物细胞类型（包括增殖性和非增殖性细胞），以实现重组蛋白的高效表达。重组腺病毒尤其适用于那些通过脂质体转染效率较低的细胞系中的基因转移和蛋白表达。病毒进入细胞后，保持染色体外状态（即不整合到宿主染色体中，因此不会激活或失活宿主基因）。最近，重组腺病毒已被用于将RNAi导入细胞。
HEK 293细胞或其变体被用作病毒扩增的宿主细胞。重组腺病毒可以在高滴度下生长（10¹⁰病毒颗粒/mL，可浓缩至10¹³病毒颗粒/mL）。浓缩后的病毒上清液通过CsCl超速离心，将病毒与细胞蛋白和培养基成分分离。超速离心后，通过透析去除CsCl。CsCl程序既繁琐又耗时（16-24小时）。
艾美捷ViraBind腺病毒微量纯化试剂盒不涉及超速离心，而是基于腺病毒衣壳蛋白的独特性质，通过离心柱捕获病毒。整个过程大约需要30分钟。每个离心柱设计用于从一个T75培养瓶或10厘米培养皿中收获的病毒进行纯化，容量可达1.0×10¹¹病毒颗粒。
ViraBind 腺病毒小量纯化试剂盒提供了一个高效的系统，用于快速纯化腺病毒，回收率超过95%。
ViraBind腺病毒微量纯化试剂盒相关产品：
1. AD-100：293AD细胞系
2. AD-200：ViraDuctin 腺病毒转导试剂，10次转导
3. VPK-109：QuickTiter 腺病毒滴度免疫测定试剂盒
4. VPK-111：快速RCA测定试剂盒
5. VPK-252：RAPAd® CMV腺病毒表达系统
ViraBind腺病毒微量纯化试剂盒（#VPK-099）组成：
1. ViraBind 离心柱和收集管（部件编号40991）：10个迷你离心柱和20个收集管的包装。
2. 上样缓冲液（部件编号40992）：一瓶10 mL。
3. 洗涤缓冲液（部件编号40993）：一瓶20 mL。
4. 洗脱缓冲液（部件编号40994）：一瓶10 mL，含25 mM Tris，pH 7.5，2.5 mM MgCl₂，1 M NaCl。
未提供材料：
1. 感兴趣的重组腺病毒
2. HEK 293细胞及细胞培养生长培养基
3. 细胞培养离心机
4. 甘油
5. 微量离心机
储存：将所有试剂盒组分储存于室温。
安全注意事项：请记住，您将处理含有感染性病毒的样本。请遵循NIH推荐的针对BSL-2生物体的所有材料的指南。
感染细胞裂解液的收获：
以下程序适用于T75培养瓶，可根据个人需求进行优化。
1. 使用HEK 293细胞，这些细胞应在感染前定期传代2-3次。将这些细胞培养至单层细胞达到90-100%汇合。
2. 用新的生长培养基替换细胞培养基，每瓶15 mL。然后将腺病毒加入培养物中。可以使用粗制或纯化的病毒库存。每细胞期望的感染复数（PFU，噬菌斑形成单位）为0.5到2。
3. 24小时后，部分细胞应处于悬浮状态。向培养瓶中加入10 mL生长培养基，并让病毒再扩增24小时。当所有细胞都处于悬浮状态时，轻轻摇晃培养瓶数次，并将所有培养基（包括细胞）收获到无菌管中。
4. 以1000 rpm离心5分钟，沉淀细胞。将细胞沉淀重悬于0.8 mL培养基中，并通过三次冻融循环从细胞中释放腺病毒。将上清液转移到另一个微量离心管中，并丢弃细胞碎片。
5. 以10,000 rpm离心10分钟，进一步沉淀任何剩余的细胞碎片。丢弃沉淀，保存上清液。如果仍可见大量细胞碎片，再次离心上清液。
注意：此步骤有助于防止在病毒纯化步骤中离心柱堵塞。
6. 病毒上清液可在-80°C下保存，或立即进行纯化（见以下纯化说明）。
结果示例：
以下图表展示了典型的纯化结果。以下数据仅供参考，不应用于解释实际结果。
图上：重组Ad-β Gal的纯化。根据纯化说明纯化重组Ad-β Gal病毒。在纯化过程中获得的每个组分及其稀释液用于感染12孔板中的A549细胞。48小时后，进行X-gal染色，并对β Gal阳性细胞（蓝色）进行计分。
图下：由激活的H-Ras诱导的膜褶皱。COS-7细胞以50 MOI（感染复数）的感染量被纯化的Ad-β Gal或Ras G12V感染。感染48小时后进行X-gal染色。通过用罗丹明偶联的鬼笔环肽染色肌动蛋白细胞骨架，可视化膜褶皱。
ViraBind腺病毒微量纯化试剂盒文献参考：
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来源：小齐讲科学
