摘要:恶性肿瘤细胞侵入正常周围组织的能力在很大程度上导致了癌症的高发病率和死亡率。侵入性需要几种不同的细胞功能,包括黏附、运动、脱落和细胞外基质蛋白水解。转移性细胞产生许多蛋白水解酶(例如溶酶体水解酶、胶原酶、纤溶酶原激活剂),同时某些细胞表面蛋白酶受体的表达也增加
恶性肿瘤细胞侵入正常周围组织的能力在很大程度上导致了癌症的高发病率和死亡率。侵入性需要几种不同的细胞功能,包括黏附、运动、脱落和细胞外基质蛋白水解。转移性细胞产生许多蛋白水解酶(例如溶酶体水解酶、胶原酶、纤溶酶原激活剂),同时某些细胞表面蛋白酶受体的表达也增加。
Cell Biolabs的CytoSelect96孔细胞侵袭检测试剂盒利用涂有基底膜的插入物来检测肿瘤细胞的侵袭特性。该试剂盒无需您预先用Calcein AM标记细胞或移除未侵入的细胞(即棉签擦拭)。任何侵入的细胞首先从膜上分离,然后裂解并用CyQuant® GR染料检测。
Cell Biolabs的CytoSelect96孔细胞侵袭检测试剂盒提供了一个稳健的系统,用于定量测定细胞侵袭。试剂盒包含足够的试剂用于评估96个样本。
艾美捷CytoSelect96孔细胞侵袭检测试剂盒(#CBA-112)检测原理:
CytoSelect96孔细胞侵袭检测试剂盒包含一个96孔板中的聚碳酸酯膜插入物(孔径8微米)。插入物膜的上表面涂有一层均匀的干燥基底膜基质溶液。这层基底膜作为屏障,区分侵袭性细胞和非侵袭性细胞。侵袭性细胞能够降解该层中的基质蛋白,并最终通过聚碳酸酯膜的孔。最后,侵入的细胞从膜上分离,并随后用CyQuant® GR染料(Invitrogen)检测。
相关产品:
1.CBA-101-C:CytoSelect24孔细胞迁移和侵袭检测(8微米,荧光法)
2.CBA-106-C:CytoSelect96孔细胞迁移和侵袭检测(8微米,荧光法)
3.CBA-111:CytoSelect24孔细胞侵袭检测(基底膜,荧光法)
4.CBA-111-COL:CytoSelect24孔细胞侵袭检测(I型胶原,荧光法)
5.CBA-112-COL:CytoSelect96孔细胞侵袭检测(I型胶原,荧光法)
CytoSelect96孔细胞侵袭检测试剂盒组成(室温运输):
1.96孔ECM侵袭板(部件编号11201):一个含有ECM涂覆插入物的无菌96孔板(见图1了解组件)。
2.96孔细胞收获托盘(部件编号10402):一个96孔托盘。
3.细胞分离液(部件编号10403):一瓶20毫升。
4.4倍裂解缓冲液(部件编号10404):一瓶10毫升。
5.CyQuant®GR染料(部件编号10105):一个75微升的管。
未提供材料
1.侵袭性细胞系
2.细胞培养基
3.无血清培养基,例如含有0.5%BSA、2mMCaCl₂和2mMMgCl₂的DMEM
4.细胞培养箱(37°C,5%CO₂环境)
5.显微镜
6.96孔微量滴定板
7.微量滴定板读数器
储存
将所有组分储存于4°C。
结果示例:
下图显示了CytoSelect™细胞侵袭检测试剂盒的典型情况。以下数据仅供参考。这些数据不应用于解释实际结果。
HT-1080细胞在细胞分离缓冲液中进行梯度稀释,随后用4倍裂解缓冲液/CyQuant® GR染料进行裂解和检测(150 µL细胞悬浮液与50 µL 4倍裂解缓冲液/染料混合)。
HT-1080或NIH3T3细胞被允许向10%胎牛血清(FBS)方向侵袭24小时,实验中加入或不加入2 µM细胞松弛素D,每次实验使用200,000个细胞。侵入聚碳酸酯膜底部的细胞被染色(见图),并按照实验方案中描述的方法用CyQuant® GR染料进行定量分析。
CytoSelect96孔细胞侵袭检测试剂盒文献参考:
1. Erkell, L. J., Schirrmacher, V. (1988) Cancer Res 48, 6933-6937.
2. Montgomery, A. M. P., De Clerck, Y. A., Langley, K. E., Reisfeld, R. A., Mueller, B. M. (1993)Cancer Res 53,693-700.
3. Monsky, W. L., Lin, C. Y., Aoyama, A., Kelly, T., Akiyama, S. K., Mueller, S. C., Chen, W. T.(1994) Cancer Res 54,5702-5710.
来源:科学潮流苑