摘要：激发光（Excitation Light）：是指照射到染料上的光源，它的波长较短，能量较高。激发光使染料分子进入激发态，即使染料分子获得足够的能量，使其从基态跃迁到激发态。
一、激光共聚焦显微镜的常见光源
包括405、488、561和640，还可能配有730。
二、荧光染料的激发光与发射光
1. 激发光（Excitation Light）：是指照射到染料上的光源，它的波长较短，能量较高。激发光使染料分子进入激发态，即使染料分子获得足够的能量，使其从基态跃迁到激发态。
2.发射光（Emission Light）：当染料分子处于激发态时，它会释放出能量，返回到基态，这个过程中释放出的光即为发射光。与激发光相比，发射光的波长较长，能量较低。
在共聚焦显微镜中，通常会检测发射光。共聚焦显微镜通过激发光激发染料，并且用光学切片技术精确地选择并捕捉染料发射出的光。这是因为发射光包含了染料在样本中所发出的实际信息，用来表征样本的荧光信号。
三、405光源可以检测的常见染料有哪些？
405 nm 光源属于紫外光范围，适合激发多种荧光染料，尤其是那些具有较短激发波长的染料。以下是一些适合 405 nm 激光共聚焦显微镜激发的常见染料：
DAPI（4',6-diamidino-2-phenylindole）：常用于DNA染色，激发光波长为 358 nm，发射光为 461 nm，适合于细胞核染色。
Hoechst 33342：类似于 DAPI，常用于细胞核染色，激发光波长为 352 nm，发射光为 461 nm。
Alexa Fluor 405：一种常见的染料，激发光波长为 405 nm，发射光约在 421 nm，适用于多重标记实验。
AmCyan（Aequorea victoria）：一种绿色荧光蛋白的变种，激发光波长为 400-410 nm，发射光为 475-500 nm。
Pacific Blue™：适用于流式细胞术和荧光显微镜，激发波长为 405 nm，发射波长为 455 nm。
mTurquoise2：一种荧光蛋白，激发波长约为 433 nm，发射波长为 474 nm，适用于细胞标记和成像。
四、激光共聚焦显微镜的488光源可以检测的染料有哪些？
1. 绿色荧光染料：
（1）FITC (Fluorescein isothiocyanate)：发射波长约为520-540 nm，常用于标记抗体和探针。
（2）Alexa Fluor 488：发射波长约为520-530 nm，具有较高的亮度和较低的光漂白速率，广泛用于生物学和医学研究。
（3）GFP (绿色荧光蛋白)：发射波长约为509 nm，是一种常见的标记蛋白的荧光蛋白。
（4）YOYO-1：发射波长大约为530 nm，常用于DNA染色。
2. 其他染料：
（1）Calcein-AM：发射波长约为510 nm，广泛用于活细胞染色。
（2）Alexa Fluor 532：发射波长约为550 nm，也可通过488 nm激光激发，尤其在染色强度和稳定性方面表现良好。
（3）CFSE (Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester)：发射波长约为520 nm，用于标记细胞，特别是在追踪细胞分裂时。
3. 染料组合与标记物：Dual-labeled probes：一些标记物（如抗体、探针）可以同时标记不同的荧光染料，其中有些染料可通过488 nm激光激发并与其他不同的荧光染料配合使用。
五、激光共聚焦显微镜的561光源可以检测的染料有哪些？
1. 橙色/红色荧光染料
（1）Alexa Fluor 555：发射波长约为565-595 nm，适合用于细胞标记和免疫荧光实验。
（2）Alexa Fluor 568：发射波长约为575-595 nm，常用于蛋白质标记，具有较高的亮度和稳定性。
（3）Tetramethylrhodamine (TRITC)：发射波长约为580-610 nm，广泛用于免疫荧光标记。
（4）Rhodamine：发射波长约为580-600 nm，常用于细胞和组织标记。
（5）Texas Red：发射波长约为595 nm，适用于细胞标记、免疫染色和其他生物学研究。
（6）mCherry：发射波长约为610-620 nm，广泛用于基因表达和活细胞成像。
2. 其他红色/橙色染料
（1）Cy3：发射波长约为570-620 nm，广泛用于多重标记实验。
（2）Dylight 594：发射波长约为618 nm，常用于蛋白质和核酸的标记。
（3）PI (Propidium Iodide)：发射波长约为617 nm，用于DNA染色，常在细胞周期分析中使用。
3. 红色荧光蛋白
（1）mRFP (monomeric Red Fluorescent Protein)：发射波长约为610-620 nm，用于标记表达的蛋白质和细胞。
六、激光共聚焦显微镜的640光源可以检测的染料有哪些？
激光共聚焦显微镜的640 nm 光源主要用于激发红色和近红外荧光染料。以下是一些常见的染料和荧光蛋白，它们可以在640 nm 激光光源下激发并发出相应的荧光：
Alexa Fluor 647
DyLight 650
Texas Red（尽管它的最佳激发波长约为595 nm，但也能在640 nm下得到有效激发）
mKate 和 mKate2（红色荧光蛋白）
PI (Propidium Iodide)（用于DNA染色，通常用于细胞死亡的研究）
Irf-640
Cy5.5
这些染料通常用于多重标记实验，特别是当需要在一个样品中区分多个不同的荧光通道时。640 nm 激光源能够激发这些染料并提供清晰的红色或近红外信号，适合用于深层样本成像或多重标签实验。
七、激光共聚焦显微镜的730光源可以检测的染料有哪些？
激光共聚焦显微镜（LCM）中，730 nm的激光光源通常用于激发一些特定的荧光染料。根据不同染料的激发光谱，730 nm光源可以用来检测以下几类常见染料：
Cy7：这是一种常见的近红外荧光染料，激发波长约为740 nm，适合在730 nm的激光下进行激发，通常用于生物标记和活体成像。
Alexa Fluor 750：这种染料的激发波长范围在745-755 nm之间，730 nm的激光源也是适合的激发光源。
IRDye 800：一种用于生物医学成像的近红外染料，可以在720-790 nm的波长范围内激发，因此730 nm激光源也是合适的。
AF750：这种染料是Alexa Fluor系列中的一员，适用于730 nm左右的激光光源。
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来源：凯视迈精密测量