摘要：非小细胞肺癌（NSCLC）是全球发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一，约70%的患者确诊时已处于晚期，传统化疗方案的有效率仅为20%-30%。尽管免疫检查点抑制剂（ICI，如PD-1/L1）的应用显著提高了晚期NSCLC患者的五年生存率（从不足5%提升至31.9%
前言
非小细胞肺癌（NSCLC）是全球发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一，约70%的患者确诊时已处于晚期，传统化疗方案的有效率仅为20%-30%。尽管免疫检查点抑制剂（ICI，如PD-1/L1）的应用显著提高了晚期NSCLC患者的五年生存率（从不足5%提升至31.9%），但ICIs耐药性仍是临床面临的重大挑战。目前，ICIs耐药的机制复杂，缺乏高敏感性的生物标志物，临床主要依赖影像学评估，但影像学检查往往明显滞后于耐药性的实际发展，并且肿瘤中假性进展的存在使得影像学评估ICIs耐药性的价值有限。
近日，杂志npj precision oncology上发表了一篇题为“Diagnostic and prognostic roles of circulating EVs circ_PPAPDC1A in ICIs resistance in NSCLC”的文章。本研究聚焦于circ_PPAPDC1A，前期发现其在奥希替尼耐药NSCLC患者中高表达，并可能与ICIs耐药相关。临床样本显示circ_PPAPDC1A在ICIs耐药的NSCLC患者中表达上调，诊断效率高（AUC = 0.98），其表达高与PFS短相关。研究结果表明，循环细胞外囊泡circ_PPAPDC1A可作为ICIs耐药诊断和预后分析的预测性生物标志物。
图片来源：npj precision oncology
主要内容
01
较高的circ_PPAPDC1A表达与较差的ICIs反应相关
肿瘤来源的循环细胞外囊泡（EVs）携带的环状RNA（circRNA）具有稳定性高、特异性强、非侵入性检测等优势，在肿瘤诊断和治疗中展现出潜力。作者收集了5对非小细胞肺癌（NSCLC）患者在奥西替尼耐药之前和之后的组织样本。高通量Arraystar circRNA微阵列确定了与奥西替尼耐药相关的差异表达circRNA（图A）。进一步的研究发现circ_PPAPDC1A在对奥西替尼产生耐药的NSCLC患者中高表达，circ_PPAPDC1A表达与ICIs应答呈负相关，是促成耐药的关键因素之一（图B，C）。
较高的circ_PPAPDC1A表达与较差的ICIs反应相关。图片来源：npj precision oncology
02
circ_PPAPDC1A在体外促进细胞增殖和克隆发生，促进细胞侵袭和迁移，并抑制细胞凋亡
作者建立了非小细胞肺癌细胞与T细胞共培养体系，研究了circ_PPAPDC1A对NSCLC细胞对ICIs敏感性的影响。.体外实验显示，circ_PPAPDC1A过表达可降低NSCLC细胞对ICIs（如Pembrolizumab）的敏感性，表现为细胞活力增强、克隆形成能力提升（图C，D）。
Pembrolizumab处理后，作者还开展了Matrigel侵袭和伤口愈合试验，结果表明了circ_PPAPDC1A 过表达显著促进了肿瘤细胞的侵袭和迁移活性，而sh-circ_PPAPDC1A组则细胞侵袭和迁移活性均显著降低。
此外，作者还研究了Pembrolizumab治疗48小时后circ_PPAPDC1A对细胞凋亡的影响。结果显示，circ_PPAPDC1A过表达组细胞凋亡率显著降低，sh-circ_PPAPDC1A组细胞凋亡率显著升高。
circ_PPAPDC1A促进体外细胞增殖和克隆发生。图片来源：npj precision oncology
03
circ_PPAPDC1A在体内促进NSCLC进展
作者进一步在体内评估了circ_PPAPDC1A对抗PD -1治疗效果的影响，结果显示，circ_PPAPDC1A过表达组肿瘤生长速度、肿瘤重量和肿瘤体积均显著增加，而sh-circ_PPAPDC1A组的这些参数均显著降低。
作者进一步用流式细胞术分析研究了皮下肿瘤内的免疫细胞群，结果显示，circ_PPAPDC1A表达与CD8+细胞数量呈负相关，circ_PPAPDC1A过表达显著降低了CD8+ T细胞和IFN-γ+细胞的比例（图E、G）。不仅如此，circ_PPAPDC1A过表达还可抑制免疫激活因子（如IFN-γ、CXCL9/10）的分泌，同时增加免疫抑制因子（如TGF-β、IL-1β）（图I、J）。
综上，研究结果表明circ_PPAPDC1A通过诱导CD8+ t细胞衰竭来促进NSCLC的进展。
circ_PPAPDC1A通过诱导CD8+ t细胞衰竭来促进NSCLC的进展。
图片来源：npj precision oncology
04
循环细胞外囊泡circ_PPAPDC1A可作为ICIs耐药诊断和预后分析的生物标志物
进一步研究表明，circ_PPAPDC1A存在于循环细胞外囊泡中，来源于非小细胞肺癌细胞。
临床队列研究（共包含40例NSCLC患者）发现，ICIs耐药患者的循环细胞外囊泡中circ_PPAPDC1A表达显著升高（图A， B）。ROC曲线分析表明，循环细胞外囊泡circ_PPAPDC1A对ICIs耐药的诊断效率较高，AUC为0.98 （图C），且其高表达与患者较短的PFS相关（6.15个月vs. 9.25个月，图F）。这些发现表明循环细胞外囊泡circ_PPAPDC1A可能作为诊断ICIs耐药性和非小细胞肺癌患者预后分析的潜在预测性生物标志物。
循环细胞外囊泡circ_PPAPDC1A可作为ICIs耐药诊断和预后分析的生物标志物。图片来源：npj precision oncology
总结与讨论
本研究旨在确定循环细胞外囊泡circ_PPAPDC1A在非小细胞肺癌ICIs耐药诊断和预后分析中的作用。体外结果显示，circ_PPAPDC1A通过促进细胞增殖和抑制细胞凋亡，降低了NSCLC细胞对ICIs的敏感性。在体内，circ_PPAPDC1A促进NSCLC进展并诱导CD8+ t细胞衰竭。临床样本显示circ_PPAPDC1A在ICIs耐药的NSCLC患者中表达上调，诊断效率高（AUC = 0.98），其表达高与PFS短相关。研究结果表明，循环细胞外囊泡circ_PPAPDC1A可作为ICIs耐药诊断和预后分析的预测性生物标志物。
circ_PPAPDC1A作为ICIs耐药的关键因素的鉴定可能对非小细胞肺癌的治疗具有重要意义。这表明靶向circ_PPAPDC1A或调节其作用可能是提高ICIs在NSCLC患者治疗效果的一种有希望的方法。此外，使用循环细胞外囊泡作为生物标志物可能允许早期识别可能对ICIs产生耐药性的患者，从而实现更个性化的治疗策略。这项研究为进一步的研究途径打开了大门。未来的研究可以关注circ_PPAPDC1A发挥其作用的潜在分子机制，并探索潜在的治疗干预措施来抵消其影响。此外，有必要进行更大规模的临床研究，以在更广泛的患者群体中验证循环细胞外囊泡的诊断和预后价值。
来源：小桔灯网
