摘要：在抗体偶联药物（ADC）和GPCR靶点药物研发中，内吞效率是决定药物疗效的关键因素。然而，传统检测方法一直面临着背景干扰强、操作复杂、通量低等痛点。

高信噪比+免洗流程+广泛兼容性，让内吞检测不再困难

在抗体偶联药物（ADC）和GPCR靶点药物研发中，内吞效率是决定药物疗效的关键因素。然而，传统检测方法一直面临着背景干扰强、操作复杂、通量低等痛点。

瑞孚迪（Revvity）新推出的pHSense™ Eu探针，通过将pH敏感型Eu探针与时间分辨荧光（TRF）检测技术巧妙结合，为ADC及GPCR研究带来了突破性解决方案！

传统内吞检测方法面临哪些困境？

ADC内吞检测方面，传统方法各有局限：

l 基于活细胞成像+pH探针的检测：仪器成本高，悬浮细胞成像困难，信噪比低

l 基于毒素偶联的杀伤检测：易受非特异性影响产生假阳性，不支持实时动力学检测

l 基于流式+pH探针的检测：背景荧光高，需避光操作，重复性一般

l 基于温度转变的荧光二抗检测：不能实现定量标准化，重复性差

GPCR内吞检测方面：

l 基于报告基因技术：仅适用于基因改造细胞系，成本高昂

l 酶片段互补技术：仅适用于特定修饰细胞系，不支持实时动力学检测

pHSense™ Eu探针的三大创新优势

1. 创新原理：低背景、高信噪比检测

pH敏感激活机制：探针在胞外中性环境（pH≥7）时荧光信号极弱，当被内吞进入内体/溶酶体（pH 4.5-6.5）后，信号强度和寿命随pH值降低而显著增强。

TRF技术提升信噪比：620nm毫秒级荧光寿命搭配微秒级延迟检测，轻松消除背景中非特异性信号干扰。

2. 操作简便：适配高通量检测

采用“免洗”流程结合酶标仪检测，大大简化操作步骤。以贴壁细胞为例，只需四步：细胞铺板 → 弃上清 → 加样孵育 → 酶标仪读数。

仅需带TRF模块的酶标仪就可在约3分钟内采集96孔数据，支持96和384孔板通量，大幅提升检测效率。

3. 广泛兼容性

兼容多种细胞类型：无论是悬浮细胞还是贴壁细胞，都能获得优异的检测效果，支持动力学检测和终点法检测。

在实际应用中，使用pHSense™ Eu检测曲妥珠单抗在BT-474贴壁细胞中的内吞信号呈现剂量依赖型增强，与靶标HER2的特异性结合能力符合预期药效曲线。

对于传统细胞成像技术难以处理的悬浮细胞内吞检测，pHSense™ Eu同样表现出色。使用该探针检测利妥昔单抗在Raji悬浮细胞中的内吞信号及动力学检测数据与文献报道一致，为抗体药或ADC在非贴壁细胞系中的评价提供了简洁、高效的标准化解决方案。

兼容不同的ADC结构：能够克服传统方法对ADC结构差异的敏感性，为不同DAR值、连接子类型的ADC提供可比性数据。

实验表明，使用pHSense™探针检测曲妥珠单抗及其不同结构ADC药物时，所有测试样本均呈现剂量依赖性内吞信号增强，且EC50值几乎一致。

兼容多种细胞系：支持SNAP-tag、Flag-tag的商品化细胞系及原代细胞系，灵活适配不同研究模型。

对于GPCR药物研发，pHSense™ Eu探针可轻松实现GPCR内化过程的动态全景监测，为GPCR类药物开发提供了从分子机制到临床转化的关键评估工具。

pHSense™ Eu探针以“高信噪比+高通量+酶标仪实时检测”三位一体的优势，成功突破了内吞检测的技术瓶颈，将有力推动ADC/GPCR药物从靶点验证到临床前研究的全程加速！

来源：科学青漾