摘要：CAR-T指利用基因工程技术改造自身的T细胞，使表达嵌合抗原受体(CAR)，改造后T细胞识别瘤细胞表面肿瘤抗原并被激活， 从而特异性杀伤瘤细胞的一种免疫细胞疗法。
2025年10月10日，BMS以15亿美元收购in vivo CAR-T公司Orbital Therapeutics；
2025年08月21日，Gilead以3.5亿美元收购in vivo CAR-T公司Interius BioTherapeutics；2025年06月30日，Abbvie以21亿美元收购in vivo CAR-T公司Capstan Therapeutics；
2025年03月17日，AstraZeneca以10亿美元收购EsoBiotec布局in vivo CAR-T。
随着MNC企业不断投资in vivo CAR-T 领域，彰显了in vivo CAR-T 的平台潜力及市场价值。
Ex vivo CAR-T与In vivo CAR-T
CAR-T指利用基因工程技术改造自身的T细胞，使表达嵌合抗原受体(CAR)，改造后T细胞识别瘤细胞表面肿瘤抗原并被激活， 从而特异性杀伤瘤细胞的一种免疫细胞疗法。
体外CAR-T(ex vivo CAR-T)的流程为：细胞采集与分离(从患者外周血中获取白细胞后分离纯化T细胞)、T细胞激活(使用抗CD3/CD28抗体激活T细胞)、病毒转导(通过病毒载体将CAR基因导入T细胞)、体外扩增(培养T细胞使其大量增殖)、细胞回输(对扩增后的CAR-T细胞进行无菌及存活率等检查，质检合格后回输到体内)。目前存在的主要问题有：周期长、成本高昂、个体差异大、实体瘤效果甚微等。
新兴技术体内CAR-T(in vivo CAR-T)则可直接通过载体(LNP或慢病毒)将CAR基因递送至体内内源性T细胞，直接在体内原位重编程为CAR-T细胞，省去了T细胞分离提取、体外CAR-T细胞扩增以及淋巴细胞清除等步骤，避免了个体差异带来的影响，有望解决实体瘤适配的难题。Ex vivoCAR-T与In vivo CAR-T
In vivo CAR-T实现路径：
mRNA-LNP与慢病毒载体
In vivo CAR-T的核心关键在于靶向递送：如何将CAR基因精准递送至体内T细胞并实现特异性表达，激活T细胞的肿瘤杀伤能力。目前主要技术路线有Ab-LNP载体与慢病毒载体，二者在递送机制及表达特性上形成互补，共同推动体内CAR-T技术的发展。
In vivo CAR-T两种递送方式
mRNA-LNP路线：
T细胞原位重编程的“瞬时表达系统”
mRNA-LNP通过“抗体偶联LNP”将CAR mRNA精准递送至体内T细胞，实现T细胞的原位重编程，其核心在于Ab-LNP靶向修饰与多功能CAR分子设计，通过抗体与T细胞表面特异性受体结合，突破传统递送的非特异性靶向瓶颈。Ab-LNP的制备及在体内CAR-T表达
通过抗体修饰构建“LNP载体-T细胞受体”的特异性靶向，其机制为：
（1）靶向富集：Ab-LNP表面偶联T细胞特异性抗体(如CD3/CD8抗体)，可与外周血或脾脏中T细胞表面的受体结合，避免被肝脏网状内皮系统(RES)清除。
（2）T细胞表面受体介导内吞：抗体与T细胞受体结合后触发内吞作用，使Ab-LNP内吞进入细胞内。
（3）mRNA释放：可电离脂质在酸性内吞体环境中质子化，引发“质子海绵效应”导致内吞体破裂，释放mRNA至T细胞细胞质实现CAR蛋白高效表达。
02Ab-LNP结构设计：四大组件的协同优化
Ab-LNP依赖“抗体-脂质-辅助成分”协同设计，各组件围绕T细胞靶向与mRNA保护进行精准调控：
（1）靶向抗体：需满足“高特异性、低免疫原性、适宜亲和力”原则，通过PEG间隔臂与LNP偶联。常用抗体有：CD3抗体(泛T细胞靶向)、CD8抗体(靶向细胞毒性T细胞)、激活调节性T细胞(Treg)、CD28抗体(兼具靶向与共刺激功能)。
（2）可电离脂质：pKa值6.2-6.5(血液环境呈电中性，内吞体环境质子化)、疏水尾部为C14-C18混合碳链(增强与T细胞膜融合能力)、头部胺基取代基优化(如四氢异喹啉结构通过π-π堆叠与mRNA 形成稳定复合物)。（3）辅助脂质与胆固醇：辅助脂质调节膜流动性，胆固醇维持颗粒结构稳定。当可电离脂质:胆固醇摩尔比≥1:1 时，Ab-LNP在37℃血浆中孵育48小时后，包封率仍保持90%以上，比例降至1:0.8时，包封率骤降至65%。
（4）PEG脂质：PEG2000-DMG在Ab-LNP表面形成水化层，延长血液循环时间，避免“加速血液清除(ABC)效应”，临床制剂中PEG脂质摩尔占比通常控制在1%-2%且采用酯键连接的可降解PEG链。
Ab-LNP的制备需严格控制工艺参数，参数偏差可能导致靶向失效或毒性升高：
Ab-LNP 临床前与临床验证：从动物模型到人体T细胞激活
（1）血液瘤治疗：宾大与Capstan合作研究显示，CD8抗体修饰的Ab-LNP递送CD19 CAR mRNA后在白血病小鼠模型中实现“三重高效”：脾脏CD8+T细胞CAR表达率68%(未修饰LNP仅5.2%)，24小时内清除90%外周血B细胞(肿瘤模拟靶点)，高剂量组(2mg/kg)的3只小鼠肿瘤完全消退，无肝脏毒性。
（2）自身免疫病：陈竹教授团队发表的HN2301临床数据显示：制剂采用CD8抗体修饰Ab-LNP：抗体密度22个/颗粒、可电离脂质：mRNA=10:1、包封率96%。5例难治性红斑狼疮患者中，高剂量组输注后6小时，外周血CD8+T细胞表达CAR并启动B细胞清除，持续10天。治疗3个月后，4例患者SLEDAI-2K指数从平均18分降至6分，仅3例出现1级CRS，无神经毒性。
（3）实体瘤探索：谭蔚泓院士团队开发的“双功能Ab-LNP”，递送CAR mRNA与趋化因子CCL21 mRNA，在黑色素瘤小鼠模型中CCL21引导CAR-T向肿瘤迁移，肿瘤内CAR-T细胞数量较普通Ab-LNP提升3.8 倍。联合PD-1抑制剂后，肿瘤抑制率达89%，无明显全身毒性，解决实体瘤中CAR-T浸润不足的痛点。
产品信息
1.Wang Q, Xiao ZX, Zheng X, et al. In Vivo CD19 CAR T-Cell Therapy for Refractory Systemic Lupus Erythematosus. N Engl J Med. 2025;393(12):1125-1136.
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