摘要：免疫组化（IHC）是一种常用于对正常和病变组织进行形态学表征的技术。在保持原组织成分、细胞特征以及结构的情况下，该方法利用抗体检测并分析蛋白表达。化学固定常用中性福尔马林缓冲液（NBF）或甲醛将细胞内以及细胞间分子相互作用固定在原位。组织样本在被切成切片以及装

免疫组化（IHC）是一种常用于对正常和病变组织进行形态学表征的技术。在保持原组织成分、细胞特征以及结构的情况下，该方法利用抗体检测并分析蛋白表达。化学固定常用中性福尔马林缓冲液（NBF）或甲醛将细胞内以及细胞间分子相互作用固定在原位。组织样本在被切成切片以及装入载玻片以供分析之前，可在石蜡中包埋或在低温溶液中进行冷冻保存。针对不同的样本或检测靶标，有不同的组织收集、保存和固定方法。

IHC通过特异性抗体结合来识别生物样本中蛋白质是否存在以及表达方式。抗体与其靶蛋白表位的精确结合可检测蛋白质中具有高度特异性的氨基酸序列。抗体也可以检测发生在蛋白质的特定氨基酸序列或基序上的特定翻译后修饰（PTM）。磷酸化特异性抗体已用于确定特定信号通路分子以及研究在不同的生物学背景下磷酸化事件中的变化。一些针对其他PTM（如乙酰化和甲基化）的特异性抗体也已被研发出来，这使得研究人员能够研究各种生物学过程。

在 Cell Signaling Technology（CST），专门负责IHC应用的科学家检测了大量的抗体，只有其中最适合应用于IHC的抗体才会被推荐使用。这些抗体也在Leica BOND RX上进行了同样严格的验证和优化，以确保那些进行自动化IHC检测的科学家所获得的数据质量。此外，我们的科学家还研发并测试了可增强抗原检测、提高IHC实验流程效率的IHC辅助试剂。我们对这些IHC实验步骤进行了十几年的优化，并在CST自己的实验室中常规应用这些步骤。您可以查看本指南的第12和13页或进行在线查询。遵循这些操作步骤，您可以获得可靠的结果。

在此，我们将重点介绍IHC实验流程的关键步骤，并提供数据来支持和解释我们在实验过程中所提的建议。此外，我们也将讨论在IHC实验过程中使用经充分验证的抗体的重要性，并提供使用石蜡包埋进行细胞团块样本制备以及手动或使用Leica BOND RX进行免疫组化染色的通用实验步骤。最后，本指南列出了CST科学家内部常用且最适合与我们的抗体配套使用的IHC辅助试剂。

Cell Signaling Technology (CST) 是一家与众不同的生命科学公司，由活跃在科研一线的科学家创立、拥有并经营，秉承高标准的产品与服务质量、技术创新和科学严谨性。于1999年创立，总部位于美国马萨诸塞州丹弗斯，全球有600多名员工。我们始终如一地为全球的科学家提供高质量产品与服务，助力他们对科学发现的探求。CST坚持以人为本，以科学为本——是一家坚持服务客户，帮助社区，关爱地球的公司。

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来源：健康俏女人