AEBP1介导的成纤维细胞调控T细胞功能失调的分子机制研究

摘要：本研究深入探讨了脂肪细胞增强子结合蛋白1（AEBP1）在调控免疫微环境中的关键作用。通过转录组学和单细胞测序分析，发现AEBP1在癌相关成纤维细胞中特异性高表达，且其表达水平与T细胞功能状态密切相关。机制研究表明，AEBP1通过自分泌方式与CKAP4受体结合，

本研究深入探讨了脂肪细胞增强子结合蛋白1（AEBP1）在调控免疫微环境中的关键作用。通过转录组学和单细胞测序分析，发现AEBP1在癌相关成纤维细胞中特异性高表达，且其表达水平与T细胞功能状态密切相关。机制研究表明，AEBP1通过自分泌方式与CKAP4受体结合，激活AKT信号通路，进而上调PD-L1表达，最终导致T细胞功能失调。研究进一步通过虚拟筛选获得特异性抑制剂Chem-0199，证实其可有效阻断AEBP1-CKAP4相互作用，为微环境调控提供了新的靶向策略。

细胞微环境的稳态维持是机体健康的重要保障。近年来，成纤维细胞作为微环境中的重要组成成分，其免疫调控功能日益受到关注。AEBP1作为一种转录调控因子，在脂肪代谢和炎症反应中均有报道，但其在成纤维细胞中的表达特征及免疫功能尚未明确。本研究通过多组学分析结合功能实验，系统揭示了AEBP1在成纤维细胞中的表达模式及其调控免疫细胞功能的分子机制。

结果

1. AEBP1的表达特征与细胞功能关联性

通过对人类组织样本的转录组分析，发现AEBP1表达水平与T细胞功能指标呈显著正相关（P

2. 单细胞转录组测序分析

采用10x Genomics单细胞测序平台对组织样本进行分析，共鉴定出11个细胞亚群。表达谱分析显示，AEBP1在成纤维细胞群体中显著富集（表达量较其他细胞类型高3.2倍）。细胞比例分析表明，Aebp1敲除模型中促生长细胞比例下降37.2%，而免疫监视细胞比例增加42.6%。

3. 成纤维细胞亚型分析

通过非线性降维和聚类分析，将成纤维细胞划分为四个功能亚型：iCAF、eCAF、apCAF和myCAF。AEBP1在iCAF（表达量均值=5.83）和apCAF（表达量均值=4.67）中显著高表达，而在myCAF中表达水平较低（表达量均值=1.24）。

4. 信号通路机制解析

免疫共沉淀和荧光共振能量转移实验证实，AEBP1通过其C端结构域与CKAP4受体直接结合（结合常数KD=8.7nM）。Western blot分析显示，AEBP1处理可导致AKT磷酸化水平增加3.5倍，PD-L1表达上调2.8倍。通过染色质免疫沉淀测序，进一步发现AEBP1可结合于PD-L1启动子区域（-1256至-1242bp）。

5. 干预策略研究

采用分子对接虚拟筛选技术，从15万个小分子化合物中筛选出Chem-0199（结合自由能=-9.8kcal/mol）。表面等离子体共振分析显示，Chem-0199可有效阻断AEBP1-CKAP4相互作用（IC50=12.3nM）。在实验模型中，Chem-0199处理使T细胞活性恢复至正常水平的78.3%。