摘要：脂肪酸是末端为羧酸的碳氢链。它们作为能量来源、结构组分以及多种生物活性化学物质（统称为氧化脂质）的前体，在生物体内具有重要作用，这些生物活性物质具有多种生物学功能，包括促炎和抗炎、血管活性、自分泌和旁分泌功能。AkrivisBio的游离脂肪酸检测试剂盒提供了一
脂肪酸是末端为羧酸的碳氢链。它们作为能量来源、结构组分以及多种生物活性化学物质（统称为氧化脂质）的前体，在生物体内具有重要作用，这些生物活性物质具有多种生物学功能，包括促炎和抗炎、血管活性、自分泌和旁分泌功能。AkrivisBio的游离脂肪酸检测试剂盒提供了一种简单、灵敏的方法，用于测量多种生物样本中的游离脂肪酸。该检测基于脂肪酸转化为辅酶A衍生物，随后被氧化，同时生成化学计量的过氧化氢，用于氧化ADHP，产生与脂肪酸含量成正比的颜色和荧光。反应中加入增强剂以促进颜色和荧光的发展。
艾美捷游离脂肪酸测定试剂盒：
货号：MA-0111
应用：基于微孔板的比色法/荧光法检测，用于测量样本中游离脂肪酸的浓度。
灵敏度：>2微摩尔
储存条件：-20°C
运输条件：凝胶冷藏包
游离脂肪酸测定试剂盒检测组分：
-检测缓冲液：25毫升，货号WMMA-0111A
-ADHP溶液：200微升，红色，货号MA-0111B
-酰基辅酶合成酶：冻干粉，蓝色，货号MA-0111C
-酰基辅酶氧化酶/辣根过氧化物酶：冻干粉，绿色，货号MA-0111D
-增强剂：200微升，紫色，货号MA-0111E
-棕榈酸标准品（1mM）：300微升，黄色，货号MA-0111F
游离脂肪酸测定试剂盒检测原理：
1.脂肪酸转化为酰基辅酶A。
2.酰基辅酶A被氧化，生成过氧化氢。
3.过氧化氢被过氧化物酶利用，将ADHP氧化为荧光素，产生强烈的颜色和荧光。
用户自备材料：
-脂质提取材料（参见AkrivisBioPI-0101脂质提取试剂盒）
-Polytron或匀浆器
-滤器
储存和处理：
将试剂盒储存于-20°C。使用前将所有组分恢复至室温。
-ADHP溶液：DMSO在略低于室温时会冻结。使用前必须恢复至室温。储存于-20°C。
-酰基辅酶合成酶；酰基辅酶氧化酶/辣根过氧化物酶：用220微升去离子水复溶冻干酶并混合。储存于-20°C。
-棕榈酸标准品：棕榈酸标准品冷冻后可能会分成两相。为了使用，将其置于热水浴（约80-100°C）中加热至高于80°C，直至溶液超过其浊点，变得非常浑浊。在加热时涡旋混合。随着溶液冷却，它将再次变得清澈。重复加热/冷却循环一次，标准品即可使用。
检测步骤：
1.标准曲线：
-比色法检测（0-10纳摩尔/孔范围）：将0、5、10、15、20、25微升的棕榈酸标准品分别加入96孔板的多个孔中。用检测缓冲液将所有孔的体积调整至50微升。这样每孔分别含有0、2、4、6、8、10纳摩尔的标准品。
-荧光法检测（
2.样本准备：
-液体样本可以直接加入96孔板中，并用检测缓冲液将所有孔的体积调整至50微升。未知样本的响应必须在所用标准曲线的范围内。如果未知样本超出此范围，则必须稀释并重新运行。
-细胞（10⁶）或组织（10毫克）用5%异丙醇/5%Tergitol溶液在小匀浆器中提取，然后过滤以去除不溶物和细胞碎片。样本已准备好使用。溶液可能呈浑浊状，但这不影响检测。每个检测使用1-20微升样本。
3.酰基辅酶合成：向所有标准品和样本孔中加入2微升酰基辅酶合成酶。混合并孵育30分钟（37°C）。
4.氧化和显色反应混合液：根据要运行的孔数（样本和标准品）准备足够的反应混合液。每个孔准备总共50微升的反应混合液，包含：
-检测缓冲液：44微升
-酰基辅酶氧化酶/辣根过氧化物酶：2微升
-ADHP溶液：2微升
-增强剂：2微升
-向每个孔中加入50微升反应混合液。在37°C下孵育反应30分钟，避光。通过在微孔板读数器中以动力学模式测量反应进程，观察颜色或荧光的发展是有用的。
5.测量：通过比色法（570纳米吸光度）或荧光法（激发/发射波长=535/587纳米）监测反应进程。当标准品的信号不再变化时，反应完成。达到终点的时间应少于30分钟。
6.典型结果：
7.计算：从所有读数中减去0纳摩尔标准品的吸光度。绘制标准曲线。斜率定义了系统的灵敏度（吸光度/纳摩尔游离脂肪酸）。将背景校正后的样本读数除以斜率，以确定游离脂肪酸的纳摩尔含量。将结果转换回原始样本中的含量：
-原始游离脂肪酸含量=从标准曲线斜率和未知吸光度确定的纳摩尔数，校正稀释：
-1.确定的纳摩尔游离脂肪酸/加入孔中的样本体积=样本中的游离脂肪酸纳摩尔/微升
-2.样本中的游离脂肪酸纳摩尔/微升×样本总体积=样本中的总游离脂肪酸纳摩尔
-3.样本中的总游离脂肪酸纳摩尔/细胞数量或组织毫克数=每细胞或每毫克组织的游离脂肪酸纳摩尔
来源：老周说科学