摘要：谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）是一种帮助维持氧化还原平衡并抵御氧化应激的酶。GPx催化还原H₂O₂和有机氢过氧化物，以谷胱甘肽作为辅底物，防止活性氧（ROS）的积累，从而避免对蛋白质、脂质和DNA造成损伤。GPx广泛分布，尤其在代谢活跃的器官（如肝脏、肾脏、肺部

谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）是一种帮助维持氧化还原平衡并抵御氧化应激的酶。GPx催化还原H₂O₂和有机氢过氧化物，以谷胱甘肽作为辅底物，防止活性氧（ROS）的积累，从而避免对蛋白质、脂质和DNA造成损伤。GPx广泛分布，尤其在代谢活跃的器官（如肝脏、肾脏、肺部和红细胞）中含量丰富。其表达水平受环境因素调节，包括饮食中的硒和氧化应激水平。GPx缺乏与多种病理状况相关，包括神经退行性疾病、心血管疾病、癌症和年龄相关性黄斑变性。AkrivisBio的谷胱甘肽过氧化物酶活性检测试剂盒是一种简单、灵敏的检测方法，能够评估多种样本中的GPx活性，灵敏度低于每孔0.2毫单位。

艾美捷谷胱甘肽过氧化物酶活性测定试剂盒：

货号：MA-0137

检测类型：定量检测

应用：一种基于微孔板的比色法检测方法，用于在多种样本中测量谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）活性，灵敏度低于每孔0.2毫单位。

灵敏度：低于0.2毫单位/孔

储存条件：-20°C

运输温度：冰凝胶包运输

保质期：自发货之日起一年

谷胱甘肽过氧化物酶活性测定试剂盒检测原理：

1.在还原型谷胱甘肽存在的情况下，GPx还原添加的枯烯氢过氧化物，过程中生成氧化型谷胱甘肽（GSSG）。

2.谷胱甘肽还原酶将GSSG还原回谷胱甘肽的还原型（GSH），同时将NADPH转化为NADP。

3.通过在340纳米处监测反应，直接跟踪NADPH的减少。

检测试剂：

-检测缓冲液：50毫升（MA-0137A）

-NADPH：冻干粉，蓝色试剂瓶（MA-0137B）

-谷胱甘肽还原酶：2微升，绿色试剂瓶（MA-0137C）

-还原型谷胱甘肽（GSH）：冻干粉，琥珀色试剂瓶（MA-0137D）

-枯烯氢过氧化物：2微升，黄色试剂瓶（MA-0137E）

-GPx阳性对照：冻干粉，红色试剂瓶（MA-0137F）

储存和处理：

未开封的试剂盒应储存于-20°C。使用前将检测缓冲液恢复至室温。打开前将所有小瓶短暂离心数秒。

-检测缓冲液：即用型，储存于4°C。

-NADPH：用0.5毫升去离子水溶解。储存于-20°C。

-谷胱甘肽还原酶：用220微升检测缓冲液溶解。使用时置于冰上。储存于-20°C。

-还原型谷胱甘肽：用220-20°C。

-枯烯氢过氧化物：用1.25毫升检测缓冲液溶解。储存于4°C。

-谷胱甘肽过氧化物酶阳性对照：用100-20°C。

-在使用过程中，所有含有酶的物质（样本、谷胱甘肽还原酶、GPx阳性对照）应置于冰上。

检测步骤：

1.标准曲线：将25微升NADPH溶液转移至975微升去离子水中，得到1毫摩尔/升NADPH溶液。将0、20、40、60、80、100微升的1毫摩尔/升NADPH溶液分别加入96孔板中，分别得到0、20、40、60、80、100纳摩尔。用检测缓冲液将所有孔的体积调整至100微升。在340纳米处测量吸光度，绘制标准曲线。

2.样本准备：在冰上将组织（10毫克）、细胞（10⁶个）或红细胞（100微升沉淀）在100微升检测缓冲液中匀浆化。在4°C下以16,000×g离心5分钟；将清亮的上清液转移至新的试管中并置于冰上。直接将血清转移至孔中。将样本的2-50微升转移至96孔板的孔中。用检测缓冲液将所有孔的体积调整至50微升。

注意：NADPH不稳定，容易被多种酶降解。未立即分析的样本应储存于-80°C或更低温度。所有样本读数必须落在标准曲线范围内。任何低于约0.3-0.4吸光度的样本读数都可能处于非线性范围内，应稀释后重新检测。

3.阳性对照和背景对照：将5微升GPx阳性对照转移至一个孔中，并用检测缓冲液调整至50微升。将50微升检测缓冲液转移至一个孔中作为背景对照，以校正可能发生的任何非GPx导致的NADPH损失。

4.准备反应：每个反应需要40微升预反应混合液。

5.启动反应：向测试样本和阳性对照（不要向背景对照孔）中加入10微升枯烯氢过氧化物以启动反应。

6.测量：在25°C下，在340纳米处动力学监测反应，时间足够长以建立反应的线性速率。

注意：在加入枯烯氢过氧化物之前，测试和阳性对照孔在15分钟预孵育后的初始340纳米吸光度应大于1.0。如果读数小于1.0，意味着样本中要么GPx含量过高（稀释后重新检测），要么GSSG含量过高。可以通过使用10千道尔顿离心过滤器从样本中去除小分子来减少高GSSG。

7.典型结果：

8.计算：从所有标准品中减去0标准品的值。绘制标准曲线。确定标准曲线的斜率。确定背景对照和测试孔的斜率。这些通常由于初始滞后和由于底物耗尽而后期减缓，呈现出轻微的S形。确定测试样本线性中间部分的斜率，并减去背景对照的斜率以校正非GPx贡献。将校正背景后的斜率除以标准曲线的斜率，得到每孔样本的斜率（纳摩尔/分钟，即毫单位）。要将结果换算回每单位样本的毫单位：

-A.将每孔的毫单位除以加入孔中的样本体积=每微升样本的毫单位。

-B.将每微升样本的毫单位乘以上述步骤2中离心后获得的上清液总体积=样本中总GPx的毫单位。

-C.将样本中的总GPx除以组织毫克数或细胞数量等=每毫克（或细胞数量等）的GPx活性毫单位。

仅用于研究！

来源：老妖聊科学