摘要：细胞转染是将外源核酸（如DNA、RNA）导入细胞的关键技术，广泛应用于基因功能研究、蛋白表达和基因治疗等领域。本文梳理了6种常见转染方法的原理与适用场景，助你快速匹配实验需求。
细胞转染是将外源核酸（如DNA、RNA）导入细胞的关键技术，广泛应用于基因功能研究、蛋白表达和基因治疗等领域。本文梳理了6种常见转染方法的原理与适用场景，助你快速匹配实验需求。
一、细胞转染的作用
通过将目标基因导入细胞，可实现：
基因过表达或沉默（如siRNA转染）蛋白功能研究（如荧光标记蛋白表达）基因编辑（如CRISPR-Cas9系统递送）二、6种常见转染方法详解
磷酸钙法
原理：DNA与磷酸钙共沉淀，通过胞吞作用进入细胞。特点：成本低，适用于贴壁细胞（如HEK293），但重复性较差。脂质体转染法
原理：阳离子脂质体包裹核酸，与细胞膜融合后释放内容物。特点：操作简单、适用性广（贴壁/悬浮细胞），但对细胞毒性较高。电穿孔法
原理：高压电脉冲使细胞膜形成瞬时空隙，核酸顺势进入。特点：适用于难转染细胞（如原代细胞、免疫细胞），但需优化电击参数。病毒载体法
原理：利用慢病毒、腺病毒等携带目的基因感染细胞。特点：转染效率高（尤其难转染细胞），但需生物安全防护，成本高。阳离子聚合物法（如PEI）
原理：带正电的聚合物与核酸结合，通过内吞作用进入细胞。特点：适合大规模转染（如悬浮培养），成本低，但可能影响细胞代谢。纳米颗粒转染法
原理：纳米材料（如金纳米颗粒）负载核酸，靶向递送至细胞。特点：低毒性、高靶向性，多用于基因治疗研究，但制备工艺复杂。三、如何选择转染方法？
细胞类型：贴壁细胞可选脂质体/磷酸钙法；原代细胞优先选电穿孔/病毒法。实验目的：瞬时表达（脂质体/PEI）vs 稳定表达（病毒法）。成本与效率：高通量筛选可选化学法，高难度转染需病毒或电穿孔。四、常见问题与解决方案
转染效率低
对策：优化DNA/RNA纯度、比例，更换转染试剂或增加促渗剂（如氯喹）。细胞死亡率高
对策：降低试剂用量，缩短转染时间，或换用低毒性方法（如纳米颗粒）。表达不稳定
对策：检查载体启动子是否适配细胞类型，或改用整合型病毒载体。五、高效检测离不开优质抗体！
转染成功后，Western Blot、免疫荧光等检测需依赖高特异性抗体。博研生物限时福利：
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来源：每天多吃饭