摘要：Cas9（CRISPR相关蛋白9）是一种由RNA引导的DNA内切酶。这种酶与CRISPR（成簇规律间隔短回文重复序列）适应性免疫系统相关，存在于多种细菌中，包括化脓性链球菌（Streptococcus pyogenes）。Cas9能够解开外来DNA（如质粒DN

Cas9（CRISPR相关蛋白9）是一种由RNA引导的DNA内切酶。这种酶与CRISPR（成簇规律间隔短回文重复序列）适应性免疫系统相关，存在于多种细菌中，包括化脓性链球菌（Streptococcus pyogenes）。Cas9能够解开外来DNA（如质粒DNA或入侵噬菌体DNA），然后检查是否存在与引导RNA的20个碱基间隔区互补的位点。如果DNA底物与引导RNA互补，Cas9会切割入侵的DNA。

Cas9蛋白因其作为基因组工程工具而引起全球关注，它能够在DNA中引起定点的双链断裂。由此产生的DNA断裂可以通过非同源末端连接和同源重组分别失活基因或引入异源基因，这在许多实验室模型生物中得到了应用。此外，Cas9几乎可以切割与其相关引导RNA互补的任何序列。在人类细胞中，已通过CRISPR/Cas9系统实现了基因敲除和基因替换。

图1：CRISPR/Cas9 DNA编辑

艾美捷Cas9(CRISPR相关蛋白9)ELISA检测试剂盒是一种酶免疫测定法，用于检测和定量细胞或组织裂解液样本中的化脓性链球菌Cas9。该试剂盒的检测灵敏度下限为1.5 ng/mL Cas9。每套试剂盒提供足够的试剂，可进行多达96次检测，包括标准曲线和未知样本。

Cas9(CRISPR相关蛋白9)ELISA检测试剂盒相关产品：

1. AKR-120：GFP定量试剂盒，荧光法

2. AKR-121：GFP ELISA试剂盒

3. AKR-122：RFP ELISA试剂盒

4. AKR-130：His标签蛋白ELISA试剂盒

Cas9(CRISPR相关蛋白9)ELISA检测试剂盒（#PRB-5079）组成：

盒子1（室温运输）：

1. 抗Cas9抗体包被板（部件编号50791B）：一个96孔条板（8×12）。

2. 生物素标记抗Cas9抗体（1000倍稀释）（部件编号50792C）：一个10 µL小瓶。

3. 链霉亲和素-酶偶联物（部件编号310803）：一个20 µL小瓶。

4. 检测稀释液（部件编号310804）：一个50 mL瓶。

5. 10倍洗液（部件编号310806）：一个100 mL瓶。

6. 底物溶液（部件编号310807）：一个12 mL棕色瓶。

7. 终止液（部件编号310808）：一个12 mL瓶。

盒子2（蓝色冰袋运输）：

1. Cas9标准品（部件编号50793D）：一个50 µL小瓶，含5 µg/mL重组化脓性链球菌Cas9。

未提供材料：

1. 细胞或组织裂解液

2. 含0.1% BSA的PBS

3. RIPA缓冲液

储存：

收货后，将Cas9标准品分装并储存于-80°C，以避免多次冻融循环。将生物素标记抗Cas9抗体储存于-20°C。将其他所有组分储存于4°C。

样本准备：

以下建议仅供参考，可根据用户的实验设计进行优化或调整。

- 细胞或组织裂解液：在裂解缓冲液（如RIPA缓冲液，25 mM Tris-HCl，pH 7.6，150 mM NaCl，1% NP-40，1%牛磺胆酸钠，0.1% SDS）中超声处理或匀浆样本，然后在4°C下以10,000 x g离心10分钟。立即进行检测，或在-80°C下储存样本，最长可达三个月。根据需要，将样本稀释于含0.1% BSA的PBS中。

检测步骤：

1. 向抗Cas9抗体包被板中加入100 µL Cas9未知样本或标准品。每个Cas9未知样本、标准品和空白对照均需进行双份检测。

2. 在室温下于轨道振荡器上孵育1小时。

3. 每孔加入250 µL 1倍洗液，洗涤微孔条3次，每次洗涤后彻底吸干。最后一次洗涤后，倒空孔内液体，并将微孔条在吸水垫或纸巾上轻拍以去除多余的1倍洗液。

4. 向每孔中加入100 µL稀释后的生物素标记抗Cas9抗体。在室温下于轨道振荡器上孵育1小时。

5. 按步骤3洗涤条孔3次。

6. 向每孔中加入100 µL稀释后的链霉亲和素-酶偶联物。在室温下于轨道振荡器上孵育1小时。

7. 按步骤3洗涤条孔3次，然后立即进行下一步。

8. 将底物溶液平衡至室温。向每孔（包括空白孔）中加入100 µL底物溶液，在室温下于轨道振荡器上孵育。实际孵育时间可能在2-30分钟之间。

注意：仔细观察平板；如果颜色迅速变化，可能需要提前终止反应，以防止饱和。

9. 向每孔（包括空白孔）中加入100 µL终止液，终止酶反应。结果应立即读取（颜色会随时间消退）。

10. 使用450 nm作为主波长，在分光光度计上读取每个微孔的吸光度。

Cas9(CRISPR相关蛋白9)ELISA检测试剂盒文献参考：

1. Heler, R; Samai, P; Modell, J. W.; Weiner, C; Goldberg, G. W.; Bikard, D; Marraffini, L. A.(2015). Nature. 519 :199–202.

2. Jinek, M.; Chylinski, K.; Fonfara, I.; Hauer, M.; Doudna, J. A.; Charpentier, E. (2012). Science.337: 816–821.

3. Mali, Prashant; Esvelt, Kevin M; Church, George M (2013). Nature Meth. 10: 957-963.

4. Mali, Prashant; Aach, John; Stranges, P Benjamin; Esvelt, Kevin M; Moosburner, Mark; Kosuri,Sriram; Yang, Luhan; Church, George M (2013). Nature Biotech. 31: 833-838.

5. Gilbert, Luke A.; Larson, Matthew H.; Morsut, Leonardo; Liu, Zairan; Brar, Gloria A.; Torres,Sandra E.; Stern-Ginossar, Noam;Brandman, Onn; Whitehead, Evan H.; Doudna, Jennifer A.;Lim, Wendell A.; Weissman, Jonathan S.; Qi, Lei S. (2013). Cell. 154: 442-451.

6. Zheng Q, Cai X, Tan MH, Schaffert S, Arnold CP, Gong X, Chen C-Z, and Huang S. (2014)BioTechniques 57:115-124.

来源：科学学僧