摘要：产品活性：Pronase E (Activity ≥ 7000 U/g) 是从灰色链霉菌 (Streptomyces griseus) 中获得的一种蛋白水解酶混合物，能够将蛋白质消化成单个氨基酸。

MCE 国际站：www.medchemexpress.cn/Pronase_E.html

品牌：MedChemExpress (MCE)

CAS：9036-06-0

Synonyms：Pronase (Activity ≥ 7000 U/g

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产品活性：Pronase E (Activity ≥ 7000 U/g) 是从灰色链霉菌 (Streptomyces griseus) 中获得的一种蛋白水解酶混合物，能够将蛋白质消化成单个氨基酸。

生物活性：Pronase E（活性 ≥ 7000 U/g）是从 Streptomyces griseus 中获得的蛋白水解酶的混合物，可以将蛋白质消化成单个氨基酸[1]。

体外：Pronase E 显著增加了所分析的大多数氨基酸的量 (PE 与 C)，尤其是 Ile、His 和 Thr[1]。 Pronase E 使用步骤：1. 储备液的制备： (1) 将 Pronase E 溶解于去离子水中，配制成 5-20 mg/ml 的储备液。 注：如用于 DNA 或 RNA 分离步骤，建议先将溶液在 56°C 下加热 15 分钟。(2) 在 37°C 下孵育 1 小时。将制备好的储备液分装为一次性等分试样，存储于 -20°C，通常可稳定保存一年。 2. DNA 分离： 直接将 Pronase E 添加到 DNA 制备系统中。制备系统应含有 0.5-1% 的 SDS，以破坏 DNA 与蛋白质的相互作用。注：使用浓度 250-500 μg 蛋白质/mL。孵育条件：37°C 下孵育 1-4 小时。 3. 蛋白质消化：(1) 将大约 0.2 μM 的蛋白质溶解在 0.2 ml 的 50 mM 碳酸氢铵缓冲液（pH 8.0）或磷酸盐缓冲液（pH 7.0）中。 (2) 添加 1%（w/w）的链霉蛋白酶 E。在 37°C 下孵育 24 小时，以进行蛋白质消化。 MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。

体内：使用 Pronase E 分离小鼠原代造血干细胞 (HSC) 的实验步骤[2] 1. 动物麻醉与腹腔暴露： (1) 对雄性或雌性小鼠进行麻醉。 (2) 在无菌操作下，通过腹腔切开术暴露肝脏。 2. 肝脏灌注操作： (1) 使用 Hanks 缓冲盐溶液（HBSS）从门静脉对肝脏进行灌注，目的是清除血液和杂质。 (2) 进行链霉蛋白酶 E 和胶原酶的酶促灌注，以解离肝脏组织。 3. 肝脏提取与细胞释放： (1) 使用无菌镊子将肝脏从腹腔内轻柔取出，并迅速转移至无菌培养皿中。 (2) 小心剥离肝包膜，通过温和的机械震荡促使细胞从肝组织中释放。 4. 细胞消化与初步离心分离： (1) 将所得细胞悬浮于含有链霉蛋白酶 E、胶原酶及 DNase 的混合酶溶液中，并在 37°C 条件下消化 20 分钟。 (2) 通过两次低速离心 (50 g，3 分钟) 分离肝细胞，收集细胞悬液。 5. HSC 的分离与密度梯度离心： (1) 对细胞悬液进行进一步的离心处理（450 g，8 分钟），收集沉淀部分。 (2) 将沉淀物重新悬浮于 18% 的 Nycodenz 溶液中，作为密度梯度分离的基础。 (3) 构建密度梯度，依次为 12% Nycodenz、8.2% Nycodenz 以及 Gey 平衡盐溶液 (GBSS)。 (4) 通过密度梯度离心，从 8.2% Nycodenz 层中分离并纯化造血干细胞 (HSC)。 注：此方案提供了标准操作流程，实际实验中请根据具体实验需求和条件进行适当调整和优化。 MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

参考文献：

[1]. José M Bruna, et al. Enhancement of the flavour development of dry fermented sausages by using a protease (Pronase E) and a cell‐free extract of Penicillium camemberti. Journal of the science of food and agriculture. Volume82, Issue5. April 2002. Pages 526-533.

[2]. Chen QT, et al. HK1 from hepatic stellate cell-derived extracellular vesicles promotes progression of hepatocellular carcinoma. Nat Metab. 2022 Oct;4(10):1306-1321.

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来源：MCE_China