贵州省红托竹荪固体菌种生产技术

摘要：我国现已实现红托竹荪、棘托竹荪和长裙竹荪等的规模化种植，主要产区有四川、福建、贵州、江西、云南、广西、湖南等省份。其中，红托竹荪（Phallus rubrovolvatus）为鬼笔目（Phallales）鬼笔科（Phallaceae）竹荪

贵州省红托竹荪固体菌种生产技术

周韬等

我国现已实现红托竹荪、棘托竹荪和长裙竹荪等的规模化种植，主要产区有四川、福建、贵州、江西、云南、广西、湖南等省份。其中，红托竹荪（Phallus rubrovolvatus）为鬼笔目（Phallales）鬼笔科（Phallaceae）竹荪属（Dictyophora）的一种真菌，被誉为“真菌皇后”，其富含总糖、氨基酸、蛋白质等多种营养物质，深受人们的喜爱，具有广阔的市场前景，也是国内商品化流通竹荪中唯一的清香型竹荪。贵州省种植的竹荪主要为红托竹荪，主产于毕节市织金县，于1986年人工驯化栽培成功，2010 年 “织金竹荪” 被认证为国家地理标志保护产品。近年来，红托竹荪种植面积不断扩大，随着市场对优质菌种需求量的持续提升和科学技术的进步，部分主体从生产固体菌种转变为生产液体菌种，但仍有大部分菌种生产主体生产固体菌种。为规范红托竹荪固体菌种生产技术，从规范培养基制备、灭菌、接种以及菌种质量参考等方面系统总结了红托竹荪固体菌种生产技术，以期为推动红托竹荪产业提质升级提供技术支持。

1 菌种生产场地要求

红托竹荪菌种场地选择交通方便、有水源、远离污染的场地，按照《食用菌菌种生产技术规程》的要求，菌种厂周边300 m 内无规模养殖的禽畜舍、垃圾和粪便堆积场、污水、废气、废渣、烟尘或粉尘污染源，50 m 内无食用菌栽培场、集贸市场。生产用原料应符合《食用菌栽培基质质量安全要求》（NY/T1935-2010），保持原料新鲜、洁净、干燥，无虫、无霉、无异味。

2 生产季节安排

目前，红托竹荪多采用林下栽培和大棚栽培，在毕节市织金县等主产区栽培种生产为7~12 月，收获期为翌年6~9月，一般固体菌种生产周期从母种至栽培种一般需7~8个月，栽培生产区可根据不同的生产时节准备菌种生产工作。

3 母种生产技术

3.1 母种配方

红托竹荪母种生产一般可使用琼脂培养基或木屑培养基，其中，琼脂斜面培养基常用配方：葡萄糖20 g、琼脂10 g、磷酸二氢钾2 g、硫酸镁0.5 g、碳酸钙1 g、竹荪煮出液1 000 mL，pH 值6.5~7.0。培养基（培养皿）常用配方：土豆100g （煮水过滤）、葡萄糖5 g、果糖25 g、蛋白胨5g、硫酸铵2.5 g、杂木屑70 g（100 目）、琼脂粉18g，水1000mL。木屑固体培养基常用配方：锯木屑（10~30 目）77.7%、麦麸 15%、玉米面3%、黄豆面2%、石膏1%、磷酸二氢钾0.2%、硫酸镁0.1%、白糖 1%，料水比1.0∶（1.3~1.5），pH 值 6.5~7.0。每支试管装培养基15~20g，用木片压成斜面，斜面高度不超过试管长度的3/4。

3.2 灭菌及接种

采用高压蒸汽灭菌，温度达121℃，压力 0.11 MPa，琼脂斜面培养基灭菌约20min，木屑固体培养基灭菌约40min。特别注意的是，应待试管培养基冷却至28℃以下进行接种，温度过高易导致接种失败。应选取八成熟、质量在30~50 g 的竹荪菌蛋，用清水洗净表面，放于0.1%二氯异氰脲酸钠液中清洗干净，并浸泡2min，再用75%酒精擦拭干净，在无菌条件下，将竹荪菌蛋剖成两半，用刀尖切开中间的白色菌柄，用无菌解剖刀切取约5 mm见方的组织块，之后用镊子轻挑组织块放置于离试管底部4~5 cm 处，轻压使组织块紧贴培养基，塞回棉塞，移至培养箱，在25℃左右、空气相对湿度65%~70%的环境下避光培养。3 d 后检查感染情况，将受到感染的全部剔除。菌丝长满试管或平板的时间为20~25 d，在此期间应定期检查菌种的生长和污染情况。

4 原种、栽培种生产技术

4.1 原种配方

结合织金县等地的生产实际，调整红托竹荪原种配方如下：木屑77.5%、麦麸 15%、黄豆面5%、白糖1%、石膏1%、硫酸镁0.2%、磷酸二氢钾0.3%。也可根据原料实际情况，做如下调整：硬杂粗木屑65%~80%、麦麸15%~25%、玉米面5%~10%、黄豆面1%~5%、石膏1%~2%、轻质碳酸钙0.5%~1.0%、磷酸二氢钾 0.1%~0.5%、硫酸镁 0.1%~0.5%。

4.2 原种培养基的制备

选用容积为500 mL的玻璃瓶，选用乳胶瓶塞，在塞底打孔，瓶塞内部使用棉花填塞。玻璃瓶装填培养料（250±30）g，松紧适度，将瓶口清洗干净，用 10～15 cm 接种棒打孔，塞上乳胶塞。选用容积为650mL的组培瓶，装填培养料（350±30）g，在中间打孔，松紧适度，并盖上瓶塞。

4.3 栽培种培养基配方

织金县等地红托竹荪的栽培种配方与原种有所区别，主要是木屑配比略有提高，玉米面等成分减少，具体配方如下：木屑77.8%、麦麸 17%、玉米面 2%、黄豆面1%、白糖1%、石膏1%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸镁0.1%，pH 值6~7，料水比1.0∶1.5。

4.4 栽培种培养基制备

栽培种栽培料装袋与原种有所区别，主要采用聚乙烯袋装填培养料，选用3.8cm套环和盖体密封，每袋装填培养料（1 000±50）g，高度（20±1）cm，松紧适度，用19 cm 接种棒打孔，套上套环，盖紧盖体。

培育好的红托竹荪栽培种（毕节市织金县）

培育好的红托竹荪原种（毕节市织金县）

4.5 灭菌及接种

采用高压蒸汽灭菌，温度121℃，压力 0.11 MPa；原种灭菌120 min、栽培种灭菌150 min。原种接种阶段，待原种培养基冷却至28℃以下，放入超净工作台，按照无菌操作，将母种划成5 mm×5 mm 的菌种块，用接种铲接入到原种培养基中间孔洞以及表面。将原种瓶转移至培养室，控制温度在25℃左右，空气相对湿度65%~70%，避光培养。栽培种接种阶段，待栽培种培养基冷却至28℃以下，放入超净工作台，按照无菌操作，右手小指和无名指与手掌夹住盖体拔出，取出接种棒，用镊子将栽培种掰成1.0~1.5 cm 大小、长度不限的块，从菌袋料孔底部向上接种，顶部用大块菌块封口，菌种量占培养基的3%~6%。接种完毕，盖回盖体。将栽培种瓶转移至培养室，控制温度在22~25℃，空气相对湿度65%~70%，避光培养。生产好的菌种需低温保存，可放置于 4~6℃低温环境中保存 3~6 个月。

毕节市织金县桂果镇红托竹荪栽培种培育

5 生产菌种的质量参考

遵循《食用菌菌种中杂菌及害虫的检验》（NY/T 1284-2007）的要求。红托竹荪母种无霉菌斑点，无酸腥臭味，无卵、蛹、幼虫、成虫，有锁状联合；生长期不超过4个月；菌种受损后有紫色反应；控制温度在22~24℃，菌丝生长速度0.8~1.0 mm/d。其原种和栽培种无霉菌斑点，无酸腥臭味，无卵、蛹、幼虫、成虫，有锁状联合；生长期不超过6个月；菌种受损后有紫色反应；控制温度在22~24℃，菌丝生长速度0.8~ 1.0 mm/d。结实性表现方面，原基分化及菌蛋期一致，菇潮明显，抗性强。外观质量参考见表1。

表1 菌种外观质量参考