ALK“靶”话说｜ALK阳性NSCLC基因检测那些事儿

摘要：间变性淋巴瘤激酶（ALK）阳性是非小细胞肺癌（NSCLC）的一种少见突变类型，由于其发病几率低，患者生存期长，因此该突变又有“钻石突变”之称。为深入探讨这一特殊类型NSCLC的诊疗进展，医脉通特设【ALK“靶”话说】专栏，广邀领域内专家学者，从基因检测、靶向药

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间变性淋巴瘤激酶（ALK）阳性是非小细胞肺癌（NSCLC）的一种少见突变类型，由于其发病几率低，患者生存期长，因此该突变又有“钻石突变”之称。为深入探讨这一特殊类型NSCLC的诊疗进展，医脉通特设【ALK“靶”话说】专栏，广邀领域内专家学者，从基因检测、靶向药物应用、患者全程管理、典型病例解析，到最新科研动态与学术热点，全方位呈现ALK阳性NSCLC的前沿知识与实战经验，助力临床医生提升诊疗水平，为患者点亮长生存之路。

在精准治疗时代，精准检测是打开精准治疗大门的钥匙。关于ALK阳性NSCLC的基因检测，我们都需要了解哪些事项呢？本文围绕ALK基因检测的适用人群、样本类型、检测方法及其优缺点、耐药机制检测等方面进行系统梳理，以助力提升基层检测的规范化水平。

ALK基因概述

ALK基因位于染色体2p23，其编码的酪氨酸激酶在正常情况下表达水平较低。当发生重排（主要为与EML4等基因融合）、扩增或点突变时，可导致ALK信号通路异常激活，促进肿瘤发生与发展。在NSCLC中，ALK融合约占3%–7%，多见于年轻、不吸烟或轻度吸烟的腺癌患者。

值得注意的是，除经典的EML4-ALK融合外，目前已发现多种ALK伴侣基因及融合变异型，其临床意义及对药物的反应可能存在差异，这也对检测技术提出了更高要求。

ALK检测的适用人群

根据《间变性淋巴瘤激酶酪氨酸激酶抑制剂治疗非小细胞肺癌指南（2025版）》，所有病理诊断为肺腺癌或者含有腺癌成分的NSCLC患者均需进行ALK基因检测[1]。此外，ALK基因也可能在肺鳞状细胞癌中检出[2]，有多个个案报道在鳞状细胞癌患者中检测出EML4-ALK基因融合，且可在接受ALK抑制剂治疗中获益[3]。同时一项针对我国1134例晚期（Ⅲb-Ⅳ期）NSCLC研究数据显示，在鳞状细胞癌（n=109）中ALK基因融合发生率可达3.7%[4]。因此，其他病理类型的NSCLC患者，也应考虑进行ALK检测，以避免遗漏潜在靶向治疗机会。

ALK检测的标本类型

样本质量直接影响检测结果的准确性。目前可用于ALK检测的样本主要包括：

组织标本：

手术切除或活检获取的福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织是首选样本类型。需注意样本保存时间（建议不超过3年）及前处理规范性，避免DNA/RNA降解影响检测灵敏度[5]。

细胞学样本：

对于无法获取组织的晚期患者，经病理评估合格的细胞学标本（如胸水细胞块、细针穿刺涂片等）可作为替代选择。需确保肿瘤细胞含量满足检测平台要求（通常≥20%）[5]。

液体活检：

在组织/细胞样本不可得时，外周血或脑脊液中的循环肿瘤DNA（ctDNA）或RNA可用于ALK检测。液体活检具有无创、可重复性强等优势，尤其适用于疗效监测与耐药机制分析。但其灵敏度受肿瘤负荷、脱落DNA量等因素限制，阴性结果需谨慎解读，必要时建议组织复检[5]。

ALK检测方法

目前临床常用的ALK检测方法包括：荧光原位杂交（FISH）、免疫组织化学（IHC）、实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）和二代测序（NGS）。这些方法均存在优点和局限性。

FISH检测：

FISH检测曾被认为是ALK融合基因检测的金标准，其优势在于直观显示基因断裂与重排信号。然而，该方法存在信号判读主观性强、无法识别融合伴侣基因、成本高、操作复杂等缺点。此外，非典型信号（如单绿信号、伴扩增等）可能导致假阴性或结果不确定。目前FISH多用于验证其他方法的阳性结果，或在争议病例中作为补充手段[1]。

IHC检测：

IHC检测基于ALK蛋白表达水平进行间接推断，与FISH检测的一致率达95%，并且具有成本低、速度快、可与常规病理切片同步进行等优点。目前，检测试剂盒Ventana ALK（D5F3）CDx临床应用广泛，其灵敏度与特异性较高，且采用二元判读（阳性/阴性），降低了判读难度。然而，IHC无法区分融合类型，对弱阳性或异质性表达病例易产生假阳性，需由经验丰富的病理医师判读，必要时以FISH或NGS验证[1]。

RT-qPCR检测：

RT-qPCR检测适用于已知ALK融合类型的快速筛查，具备高灵敏度与特异性，操作相对简便。但其高度依赖RNA质量，且仅能检测已知融合型别，对于新型伴侣基因或复杂重排易漏检，存在假阴性风险[1]。

NGS检测：

NGS可同时检测ALK融合（包括未知型别）、点突变、扩增及共突变，提供全面的基因变异图谱。基于RNA的NGS尤其适合融合基因检测，避免DNA水平内含子干扰，提高检出率。NGS的局限性在于成本较高、数据分析复杂，且探针设计不当时可能出现漏检。随着技术普及与成本下降，NGS正逐渐成为ALK检测的主流平台[1]。

此外，在选择检测方法时，还应综合考虑送检标本类型、标本质量、费用、耗时等因素。

ALK抑制剂耐药机制检测

ALK抑制剂耐药可分为原发性和继发性耐药，主要包括EML4-ALK融合亚型的影响、ALK激酶区突变、ALK基因扩增，以及基因旁路的激活、组织亚型或谱系改变等[6]。对于ALK抑制剂耐药的患者，基因检测内容应由临床医师和分子病理检测医师共同讨论决定。如果患者在接受ALK抑制剂一线治疗后出现耐药，建议患者再取活检进行组织学诊断和基因检测，优先进行NGS基因检测，分析具体基因变异类型，包括获得性突变和融合突变类型等，用于指导选择最恰当的二线治疗药物[5]。

小结

ALK基因检测是NSCLC精准诊疗的基础。随着检测技术的进步和临床数据的积累，检测策略正从单一方法向多平台互补、从组织为主向组织与液体活检结合的方向发展。未来，随着更多ALK融合伴侣的发现及耐药机制的深入研究，检测内容将更加强调全面性与动态性。临床医生应与病理科、分子诊断中心密切协作，根据患者具体情况选择合适的检测样本与方法，确保检测结果的准确性与临床可操作性，最终为患者制定个体化治疗策略，提升生存获益。