摘要：4',6-二脒基-2-苯基吲哚 DAPI（蓝色）是一种可对 DNA 染色的细胞核染色试剂，它在嵌入双链 DNA 后释放蓝色荧光，亮度增强约 20 倍。4',6-二脒基-2-苯基吲哚 DAPI（蓝色） 常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。
4',6-二脒基-2-苯基吲哚 DAPI（蓝色）是一种可对 DNA 染色的细胞核染色试剂，它在嵌入双链 DNA 后释放蓝色荧光，亮度增强约 20 倍。4',6-二脒基-2-苯基吲哚 DAPI（蓝色） 常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。4',6-二脒基-2-苯基吲哚 DAPI（蓝色） 具有很高的光漂白承受水平，能用来检测酵母线粒体 DNA、叶绿体 DNA、病毒 DNA 以及染色体 DNA 等。在较低浓度 (1 µg/mL) 时，4',6-二脒基-2-苯基吲哚 DAPI（蓝色） 不可渗透于活细胞，但可用作固定细胞或组织部分的核染色剂；在较高浓度 (10 µg/mL) 时，4',6-二脒基-2-苯基吲哚 DAPI（蓝色） 可用于染色活细胞。
以贴壁细胞（96 孔板）举例，每孔 100 μL 染色工作液，染色工作液浓度按 5 µg/mL 计算，10 mg配置为工作液大概可以用于 20000 个孔的染色。
DAPI（4',6-Diamidino-2-phenylindole）是一种经典的蓝色荧光核酸染料，可与双链 DNA 的 A-T 碱基对区域结合，形成稳定的复合物。其激发 / 发射波长约为 358/461nm，在紫外光激发下发出强烈蓝色荧光，优势源于高 DNA 结合特异性、操作简便性及广泛的适用性。
DAPI 与 DNA 的结合常数（K≈10^7 M⁻¹）极高，每个 DAPI 分子可与 5 个碱基对结合，优先识别 A-T 富集区域，对 RNA 的结合力极弱（需 RNase 处理以完全排除干扰）。
在固定细胞或组织切片中，DAPI 可穿透细胞膜（需透膜处理），均匀标记细胞核 DNA，呈现清晰的蓝色荧光，适用于核形态观察（如染色质凝集、核碎裂）。
2.快速染色与信号稳定性
染色动力学快：固定样本中加入 DAPI 后 1-5 分钟即可完成标记，荧光信号在固定液（如多聚甲醛）中可维持数周，适合批量样本处理或长期保存。
抗光漂白能力中等：相比荧光蛋白（如 GFP），DAPI 的光稳定性较好，适合短时间荧光成像（如 10 分钟内的核形态拍摄），但长时间激发可能导致信号衰减。
无需复杂预处理：固定细胞、组织切片、染色体涂片等样本均可直接用 DAPI 染色，无需抗体孵育或酶处理，相比免疫荧光标记节省 2-3 小时实验时间。
兼容多种固定方式：甲醛、乙醇或丙酮固定的样本均适用，且染色后可与其他荧光探针（如 FITC、Texas Red）共染，实现核与细胞器的双重标记。
2.低成本与高性价比
DAPI 价格低廉（约为特异性核蛋白抗体的 1/50），且用量极少（工作浓度通常为 1-10 μg/mL），适合高通量筛选（如 96 孔板细胞毒性检测）或教学实验。
激发波长适配紫外光源：DAPI 可被荧光显微镜的 UV 通道（如 365nm 激发）或流式细胞仪的紫外激光器激发，发射的蓝色荧光（461nm）与绿色（FITC）、红色（Texas Red）等荧光探针的光谱重叠少，便于多色分析。
核定位参照作用：在免疫荧光实验中，DAPI 常作为核标记的 “标配”，与其他荧光抗体（如 α-tubulin、GFP 融合蛋白）共染，确定目标分子的亚细胞定位（如核内 vs. 胞质）。
2.流式细胞术的 DNA 定量潜力
通过流式细胞仪检测 DAPI 荧光强度，可定量细胞 DNA 含量，区分 G1/S/G2 期（如 HeLa 细胞 G1 期荧光强度为 S 期的 50%），虽灵敏度略低于 PI，但操作更简便（无需破膜）。
五、典型应用场景
组织学与细胞形态学研究肿瘤组织切片中标记细胞核，评估细胞增殖密度（如 Ki-67 + 细胞与 DAPI 的共定位）；在神经组织中通过 DAPI 核计数，量化神经元数量（如脑区细胞密度分析）。
2.染色体与核结构分析
细胞分裂中期染色体的 DAPI 染色，用于核型分析（如检测染色体数目异常）；在免疫荧光中结合着丝粒抗体，观察有丝分裂异常（如非整倍体形成）。
3.细胞毒性与凋亡检测
药物处理后，通过 DAPI 染色观察核形态变化（如凋亡细胞的核固缩、碎裂），配合 Annexin V 或 Caspase-3 抗体，验证凋亡进程。
4.微生物细胞核标记
在真菌（如酵母）或原生动物中，DAPI 可标记其细胞核（如疟原虫裂殖体的核分裂），辅助病原体侵染机制研究。
六、注意事项与局限性
活细胞标记限制：DAPI 对活细胞毒性较高，且需透膜处理（如 Triton X-100），因此极少用于活细胞染色，活细胞核标记优先选择 Hoechst 33342。紫外激发光的局限性：紫外光对样本损伤较大，且部分荧光显微镜（如倒置显微镜）可能缺乏 UV 通道，需提前确认仪器配置。RNA 干扰排除：若需精确 DNA 定量，建议染色时加入 RNase A（50 μg/mL），避免 RNA 非特异性结合导致的荧光强度高估（约 10-15%）。总结
DAPI 凭借其对 DNA 的强结合力、操作简便性及低成本优势，成为细胞核标记的 “金标准” 工具，尤其适合固定样本的核形态观察、多色荧光共定位及基础教学实验。尽管在活细胞适用性和光谱穿透性上存在局限，但其 “快速 + 高效 + 广谱” 的特性，使其在细胞生物学、病理学及遗传学研究中保持着不可替代的地位。
来源：闻闻说科学