摘要：在细胞培养实验中，支原体污染是一个普遍且棘手的问题。据估计，细胞培养中的支原体污染率可高达15-35%，甚至在某些情况下达到63%。由于支原体感染难以通过肉眼检测，且对细胞生长率影响较小，因此很容易被忽视，从而影响实验结果的可靠性。本文旨在探讨如何有效预防细胞

在细胞培养实验中，支原体污染是一个普遍且棘手的问题。据估计，细胞培养中的支原体污染率可高达15-35%，甚至在某些情况下达到63%。由于支原体感染难以通过肉眼检测，且对细胞生长率影响较小，因此很容易被忽视，从而影响实验结果的可靠性。本文旨在探讨如何有效预防细胞实验超净工作台内发生支原体污染。

1. 控制环境污染

环境是支原体污染的主要来源之一。因此，控制环境污染是预防支原体污染的首要任务。细胞培养实验室应保持整洁，定期清洁和消毒，包括环境空气消毒、物体表面消毒、生物安全柜或超净工作台灭菌及培养箱消毒。目前，过氧化氢干雾灭菌技术被认为是替代甲醛熏蒸的有效消毒方式，其灭菌效果全面彻底，不留死角。

2. 严格实验操作

实验操作不规范是导致支原体污染的重要原因。在细胞培养过程中，应执行良好的细胞培养规范，包括一次只培养一个细胞系，清晰标记并专用移液器和吸头，避免交叉污染。同时，应定期维护移液器和液体处理控制器，减少液体溢漏和飞溅，从而降低污染风险。

3. 保证无菌环境

细胞培养和器材的无菌状态是预防支原体污染的关键。在细胞培养过程中，应使用无菌耗材，并在使用前进行高压灭菌处理。对于细胞培养试剂和培养基，应使用0.1μm孔径的无菌过滤器进行过滤，以有效防止支原体通过气溶胶传播。

4. 通风与防护

通风是预防支原体污染的重要手段。在细胞间工作台四周的通风应保持畅通，紫外灭菌时和做实验时均应开启通风设备。75%的循环风可以有效阻止支原体进入工作区域。此外，使用支原体专用杀除剂的湿巾对工作台、超净台、培养箱等细胞培养环境进行定期消毒，也是有效预防支原体污染的措施。

5. 支原体检测与清除

定期检测所有细胞系的支原体污染情况，尤其是新细胞系，是预防支原体污染的必要措施。将新细胞系隔离在单独的培养箱中，直到明确证明其未受支原体污染。若细胞发生支原体污染，应使用有效的支原体清除试剂进行清除。基于截短侧耳素类衍生物和四环素衍生物的抗生素溶液联合使用，可以取得良好的效果。

结论

预防细胞实验超净工作台内发生支原体污染是一个综合性的任务，需要控制环境污染、严格实验操作、保证无菌环境、加强通风与防护以及定期检测与清除支原体。通过执行这些措施，可以显著降低细胞培养实验室的支原体污染及传播风险，确保实验结果的准确性和可靠性。

来源：科普一些小知识