摘要：这种多重ELISA试剂盒用于Th1/Th2/Th17细胞因子，旨在半定量和同时测定与T辅助细胞分化相关的细胞因子。该试剂盒同时测定干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-10（IL-10）、白细胞介素-13

这种多重ELISA试剂盒用于Th1/Th2/Th17细胞因子，旨在半定量和同时测定与T辅助细胞分化相关的细胞因子。该试剂盒同时测定干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-10（IL-10）、白细胞介素-13（IL-13）、白细胞介素-17A（IL-17A）、白细胞介素-22（IL-22）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α），在细胞培养上清液和其他生物样本中。结合其他Anogen定量细胞因子ELISA试剂盒，Th1/Th2/Th17细胞因子多重ELISA试剂盒有望用于研究各种疾病模型中细胞因子表达与T辅助细胞分化之间的关系。

该试剂盒仅供实验室研究使用，不应在任何诊断或治疗程序中使用。

艾美捷Anogen多重人细胞因子ELISA试剂盒(Th1/Th2/Th17)#EM10003检测原理：

这种酶联免疫吸附测定（ELISA）应用了一种称为定量夹心免疫测定的技术。试剂盒中包含的8孔条上的微孔已预先涂有针对IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、IL-13、IL-17、IL-22和TNF-α的单克隆抗体。然后将标准品或样本添加到条上，稍后将添加生物素标记的检测抗体混合物。如果存在上述细胞因子，它们将通过预先涂在孔上的抗体结合并固定，然后被生物素结合物“夹心”。微孔板孔被彻底清洗以去除样本中未结合的成分。为了定量测定样本中存在的细胞因子量，向每个微孔板孔中添加与辣根过氧化物酶（HRP）结合的亲和素并孵育。亲和素是一种含有四个相同亚基的四聚体，每个亚基都有一个对生物素具有高亲和力的结合位点。孔被彻底清洗以去除所有未结合的HRP标记的亲和素。向每个孔中添加TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯胺）底物溶液。酶（HRP）和底物被允许在短暂的孵育期间反应。只有那些含有涂层抗体和特定细胞因子、生物素标记的抗体和酶标记的亲和素的孔才会发展成蓝色。颜色发展的强度与每个孔中存在的特定细胞因子的浓度成正比。通过添加硫酸溶液终止酶-底物反应，颜色将变为黄色。强度在450纳米±2纳米的波长下通过分光光度计测量。

样本与用类似基质稀释的标准品一起测试，或使用试剂盒提供的校准稀释液之一。这允许操作员产生光密度（O.D）与细胞因子浓度（pg/mL）的关系。然后通过将样本的O.D.与标准品进行比较来确定样本中细胞因子的浓度。

程序限制：

-在某些情况下，高水平的干扰因素可能导致异常结果。

-试剂盒不应在试剂盒标签上的有效期之后使用。

-标准稀释液、操作员移液技术、洗涤技术、孵育时间或温度以及试剂盒年龄的任何变化都可能导致试剂盒性能的变化。

-生物样本中存在的可溶性受体或其他结合蛋白不一定干扰样本中配体的测量。然而，在测试这些因素之前，不能排除干扰的可能性。

结果计算：

从A行到H行，每个孔上的OD读数反映了IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、IL-13、IL-17A、IL-22和TNF-α这八种细胞因子的浓度。在半定量检测中，可以从高浓度标准和低浓度的OD读数生成8个粗略曲线，通过将样本在每个8个孔中的OD读数绘制到其标准曲线上，可以获得样本中细胞因子的近似浓度。如标准曲线部分所示，实际标准曲线不必完全直线，因此，从两点导出的粗略曲线获得的浓度可能不是很准确。

为了获得更准确的结果，操作员可以与测试样本同时测试更多的稀释点。对于定量测量多个样本中的单一细胞因子浓度，Anogen也提供了单个细胞因子的定量ELISA检测试剂盒。

标准曲线：

上述数据生成的细胞因子标准曲线仅供参考。

文献参考：

1. Harrington, LE; Hatton, RD; Mangan, PR; Turner, Henrietta; Murphy, Theresa L; Murphy, Kenneth M; Weaver, Casey T (2005). "Interleukin 17-producing CD4+ effector T cells develop via a lineage distinct from the T helper type 1 and 2 lineages". Nature

Immunology 6 (11): 1023–32.

2. Hirota K, Duarte JH, Veldhoen M, Hornsby E, Li Y, Cua DJ, Ahlfors H, Wilhelm C, Tolaini M, Menzel U, Garefalaki A, Potocnik AJ, Stockinger B. Nat Immunol; Duarte; Veldhoen; Hornsby; Li; Cua; Ahlfors; Wilhelm; Tolaini; Menzel; Garefalaki; Potocnik; Stockinger (2011). “Fate mapping of IL-17 producing T cells in inflammatory responses. Nature Immunology 12 (3): 255–63

3. Nakayamada S., Takahashi H., Kanno Y., O'Shea J.J. (2012). “Help T cell diversity and plasticity” Current Opinion in Immunology 24 (3): 297–302.

来源：必本科学社区