摘要：国内首家基于流式荧光发光法（Flow Luminescence Immunoassay，FLIA）自主研发的多因子检测试剂盒（Multiplex Assay Kit），可实现快速高效的蛋白质分析。仅需20μL样本即可实现多种蛋白的同步检测，极大减少检测样本使用

国内首家基于流式荧光发光法（Flow Luminescence Immunoassay，FLIA）自主研发的多因子检测试剂盒（Multiplex Assay Kit），可实现快速高效的蛋白质分析。仅需20μL样本即可实现多种蛋白的同步检测，极大减少检测样本使用量、时间、人力和经费支出。目前云克隆Multiplex Assay Kit已涵盖人、大鼠、小鼠等10多种物种、2000多个检测指标，可应用于疾病机理探索、药理药效及安全性评价实验。

作为一项热门的检测技术，多因子检测技术备受研究工作者的关注，并针对产品提出不少技术问题。在本篇文章中，我们整理了常见的实验问题，为大家答疑解惑。

Q1 Multiplex Assay Kit适用的样本类型包括哪些？

A1 样本：血清、血浆、组织匀浆上清、细胞裂解液、细胞培养上清和其它生物液体(脑脊液、肺泡灌洗液、唾液等)。

Q2 目前一盒Multiplex Assay Kit能检测多少个靶标？

A2 一盒能测1-8个靶标，超过8个靶标，分成多个小于或等于8个靶标。

Q3 一盒Multiplex Assay Kit能测多少例样本？

A3 一个试剂盒有96test，每组标曲使用7test。所以，有89test可用于样本检测。而实验是否安排预实验和复孔会进一步改变可检测的样本数量。

Q4 标准品和样本是否需要做复孔？

A4 主要取决于客户的选择。Multiplex Assay Kit的检测每个样本孔单个靶标会测定50个磁性微球的信号取中位值，所以在检测准确性和客观性上是很好的，一般无需设置复孔，但客户如关心偶然的操作误差，也可以考虑对标准品和样本设置复孔。

Q5 Multiplex Assay Kit的样本如何处理？

A5 样本处理与ELISA试剂盒的样本处理方法一样。

样本处理方法链接如下：

Q6 Multiplex Assay Kit检测时样本是否需要稀释？是否提供样本稀释液？

A6 血清/血浆样本，我们根据内部验证结果推荐样本稀释倍数。其他样本类型建议客户自行做预实验确定样本合适的稀释比例。试剂盒中未配备样本稀释液，如客户样本需要稀释，建议用0.01mol/L PBS。

Q7 Multiplex Assay Kit的有效期多久？

A7 有效期为1年。

Q8 Multiplex Assay Kit的货期多久？

A8 靶标物数量小于等于4，货期1-3周；靶标物大于4，货期3-4周；

如果订购试剂盒数量多，货期可能需延长。如需加急，请订购时提出。

Q9 Multiplex Assay Kit试剂盒组分中是否有QC？

A9 试剂盒组分中不含QC，如客户需要，我们也可提供。

Q10 Multiplex Assay Kit检测范围和灵敏度。

A10 流式荧光发光法检测试剂盒分为单因子检测试剂盒和多因子检测试剂盒。单因子检测试剂盒检测范围和灵敏度可参考官网产品页面信息。多因子检测试剂盒属于定制产品，需要制备后才有准确信息。通常多因子检测试剂盒的检测范围和灵敏度与单因子检测试剂盒一样。如果客户对于检测范围和灵敏度有要求，请订购前和我们沟通，我们会依据客户需求调整检测范围和灵敏度，尽可能满足客户的要求。

Q11 Multiplex Assay Kit各种性能如何验证？

A11 稳定性：37℃破坏性实验。

批次差异：出货前我们会安排验证，确保批内差和批间差都小于10%。

特异性：单因子检测试剂盒会验证结构和功能类似物，多因子检测试剂盒会验证组合间的各因子间是否存在干扰。

Q12 Multiplex Assay Kit中磁性微球是什么材质？试剂盒试剂中是否含有乙醇或其他表面活性剂？

A12 磁性微球核心是氧化铁，覆盖有羧基材料和其他塑料成分。磁性微球用荧光染色法进行编码，通过调节两种荧光染料的不同配比来获得多达100种不同的磁性微球。试剂盒试剂不含有乙醇或其他表面活性剂。

Q13 Multiplex Assay Kit中的磁性微球和其他公司的luminex磁性微球是否通用？

A13 与其他公司的luminex磁性微球通用，但是由于偶联技术以及实验所使用的抗体对的差异，不建议不同试剂盒的微球和试剂混用。

Q14 如何将抗体结合到磁性微球上？

A14 一般采用羧基氨基偶联法。部分指标采用此方法实验效果不理想时，会更换偶联方法。

Q15 磁性微球的直径有多长？

A15 磁性微球的直径为6.5μm。

Q16 是否能够提供包被蛋白或抗体的磁性微球？

A16 可以提供。如无特殊要求，磁性微球的数量按2500粒/孔/靶标计算。包被蛋白或抗体的磁性微球产品可以出具验证报告，建议4℃保存，不能冷冻保存。

Q17 代测样本需要怎么寄送？

A17 有条件用干冰，若无干冰，也可使用冰袋，尽量保持低温运输。

Q18 代测的样本建议放在什么样本管中？

A18 建议用尖底的EP管装样品，0.5mL的EP管最好，用1.5或2mL甚至更大的EP管装液体样本送样会增加取样损耗，同时样本蒸发&管壁粘附也会导致样品损失，所以寄送时需要算上10%的损耗。

Q19 代测实验要求寄送的样本体积是多少？

A19 对于样本中靶标物浓度低的，如果客户样本充足的话，建议提供110μL/例/盒，如果不充足建议至少提供60μL/例/盒，如果样本量少于60μL/例/盒，实验时会用样本稀释液将样本稀释至100μL后进行实验，如果样本中靶标含量低，就可能存在测不到的风险。

Q20 代测实验一盒试剂盒分两次测，代测费还是按5000元/盒收吗?

A20 如果两次实验是同一批样本预实验&正式实验，按一次收费。如果分两次检测，且两次送样和检测间隔时间比较长，按两次收费。

Q21 Multiplex Assay Kit标准曲线拟合有哪些方法？

A21 常用的拟合方式有两种：

①浓度和MFI取双对数后，二次函数拟合，参考链接如下：

②浓度和MFI取双对数后，四参数拟合，使用ELISA CALC.软件。

Q22 读数时磁珠数不足（低于50），测值异常，可能的原因及解决方案有哪些?

A22 原因及解决方案如下：

Q23 Multiplex Assay Kit是否可以用流式细胞仪读取数据?

A23 目前的Multiplex Assay Kit不适用流式细胞仪，但是我们正在开发适用于流式细胞仪的多因子检测试剂盒产品，本月已开始测试，敬请期待！

以上是我们本期的分享。如果客户对于Multiplex Assay Kit还有其它问题，欢迎随时联系我们，我们会尽快给出回复。

来源：小猫说科学