摘要：泰克生物致力于全新的药物抗体，靶向多肽药物的技术开发服务。我们搭建了完善的酵母表面展示技术系统，经过多年的项目积累后，结合我们靶向肽筛选（细胞筛选，动物体内筛选）的经验，我们特推出了细胞内环境水平互作发现验证体系，即酵母杂交验证体系。化繁为简，我们采用改进的S

泰克生物致力于全新的药物抗体，靶向多肽药物的技术开发服务。我们搭建了完善的酵母表面展示技术系统，经过多年的项目积累后，结合我们靶向肽筛选（细胞筛选，动物体内筛选）的经验，我们特推出了细胞内环境水平互作发现验证体系，即酵母杂交验证体系。化繁为简，我们采用改进的SMART技术为客户构建cDNA酵母文库并提供衍生出来的系列酵母杂交验证服务。

█ 酵母双杂交技术（膜杂交系统）基本原理

与酵母单杂交技术类似，酵母双杂交基本原理上也是基于真核酵母中的转录激活因子具有两个不同的结构域：DNA结合结构域（DNA binding domain，DNA-BD）和转录激活结构域（activation domain，AD），这两个结构域的功能相互不影响，单独作用时不能发生激活转录效应，只有当二者在同一个细胞中且在空间上充分接近的时候，才能行使完整的转录激活因子的活性，使得下游基因得到转录。因此验证定位于细胞核内部的互作时，酵母单杂交技术与双杂交技术均可以采用GAL4转录因子作为报告体系，这种验证具有很大的局限性，当我们需要验证胞质内蛋白的相互作用时，这个系统难以胜任。科学家为了解决这种问题，开创性的开发了核外双杂交技术（又称为：酵母双杂交-膜杂交系统）。泰克生物为客户提供高质量的酵母双杂交（膜系统）服务，Yeast two-hybrid based on membrane 即Y2Hm服务，包括已知蛋白的互作验证、酵母双杂交（膜系统）文库的构建与筛选、基于酵母双杂交原理的蛋白自身的转录激活验证、膜蛋白与膜蛋白/胞质蛋白的互作验证等。

膜蛋白互作酵母双杂系统原理如图1所示：

图1 膜蛋白互作酵母双杂系统示意图

膜蛋白互作酵母双杂系统是基于泛素（split-ubiquitin）介导的分离-合并-切割系统搭建的，泛素蛋白分成2个结构域：N端结构域（称为：Nub结构域）和C端结构域（称为：Cub结构域），这两个结构域在同一个细胞内部靠近后能够形成完整的泛素蛋白，泛素蛋白可以被泛素特异性蛋白酶（UBP，ubiquitin binding proteins; 该酶识别完整的泛素蛋白）识别。在膜蛋白互作酵母双杂交系统中，将一种目标蛋白（Prey蛋白：膜蛋白或细胞质蛋白）融合到泛素蛋白Nub结构域的C端（NubG/NubA，是将泛素分子被截断后的N端进行改造，从而降低Cub与Nub两者之间的亲和性，避免其发生自发重组现象）；将另外一种蛋白（bait蛋白：饵蛋白）连接到Cub结构域的N端，在Cub结构域的C端融合一个人工设计的转录因子蛋白（由细菌lexA的DNA结合结构域和单纯疱疹病毒VP16蛋白的激活结构域组成）。当两种蛋白相互结合时，Nub和Cub结构相互靠近，被泛素特异性蛋白酶识别，然后切割泛素融合蛋白，释放转录因子，转录因子进入细胞核后结合到特定的报告基因上游，进行报告基因的转录和表达。

█ 酵母双杂交技术（膜杂交系统）筛选流程

图2 膜蛋白杂交酵母杂交系统流程图

泰克生物建立了基于酵母双杂交（膜系统）的膜蛋白互作验证平台、膜蛋白和胞质蛋白互作验证平台、酵母双杂交cDNA文库构建与筛选平台（可发现众多天然的、潜在的互作蛋白）。泰克生物构建的酵母双杂交cDNA文库/多肽文库的库容可达10^6-10^7，文库多样性、插入率均可达90%以上，满足各类客户对于酵母双杂交（膜系统）文库的质量要求。同时，泰克生物还能提供酵母双杂交（膜系统）文库构建与筛选的配套的下游表达验证和亲和力测定验证等一站式技术服务，客户只需要提供具体的靶蛋白序列信息、需要构建的文库种类以及样本信息，泰克生物的科学家均能够根据客户的需求进行合理的方案设计和个性化定制，助力客户的科研项目。

来源：泰克生物