科普：体外转录 mRNA | 信使RNA产品及定制服务

摘要：萌家人们好，今天我们来学习什么是MRna？mRNA(信使核糖核酸)是由DNA的一条链作为模板转录而来，并且携带遗传信息能指导蛋白质合成的一类单链RNA。

萌家人们好，今天我们来学习什么是MRna？mRNA(信使核糖核酸)是由DNA的一条链作为模板转录而来，并且携带遗传信息能指导蛋白质合成的一类单链RNA。

mRNA由5部分组成，分别是5帽子(5"Cap)、3'未翻译区(3"UTR)、开放阅读框(3"UTR)、3'未翻译区(Poly(A)Tail)和多聚A尾(Poly(A)Tail)组成。5帽子可与elF4E结合从而启动翻译，还可以保护mRNA，避免mRNA被核酸外切酶切割。

根据甲基化程度不同我们把5'帽子分为3种类型，即Cap0、Cap1和Cap2。

·mRNA的结构：多聚A尾和聚腺苷酸结合蛋白(PABP)结合，招募elF4G并增强PABP与帽结构的亲和力，形成mRNA环，防止mRNA降解并促进核糖体再进入翻译。

·另外开放阅读框也十分重要，它包含编码序列，非编码区位于开放阅读框的两侧，在调节翻译和维持mRNA稳定性方面发挥着作用。

·体外转录(共转录加帽)：体外转录是以线性DNA为模板制备，mRNA主要包括提取质粒、质粒线性化、体外转录(共转录加帽)、分离纯化等过程。我们可以使用产生平端或5'末端的酶进行质粒线性化，例如可以使用BspQI限制性内切酶，而且无需在限制性位点处添加3'末端核苷酸序列。

体外转录分为2种，分别是转录后加帽和共转录加帽。转录后加帽包含两步，先转录生成mRNA，然后使用加帽酶进行加帽。酶促反应加帽效率很高，但需要额外的纯化和反应步骤。

我们将NTP、DNA模板和RNA聚合酶加入反应体系中，体外转录产生mRNA，然后纯化mRNA以去除NTP、DNA和酶。最后添加四种成分：GTP牛痘病毒加帽酶(Vaccinia Capping Enzyme，VCE)、2-0-甲基转移酶(2-0-methyltransferase)和S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosyl-methionine，SAM或AdoMet)来进行加帽。

体外转录可分为2种：转录后加帽(酶促加帽)和共转录加帽。通过使用帽类似物来共转录制携带帽子结构的mRNA，只需要一步就可以完成，减少生产步骤和所需要的酶种类，这个过程简便快速。