摘要:测序结果精确定蛋白身份通常涉及几个步骤,主要是蛋白质组学的方法,特别是质谱(Mass Spectrometry, MS)技术。下面是一个典型的蛋白质鉴定流程:
测序结果精确定蛋白身份通常涉及几个步骤,主要是蛋白质组学的方法,特别是质谱(Mass Spectrometry, MS)技术。下面是一个典型的蛋白质鉴定流程:
1、样本准备
首先需要从生物样本中提取蛋白质并可能需要通过电泳等方法分离。
2、蛋白质消化
将提取的蛋白质进行酶切,通常使用胰蛋白酶(Trypsin)将蛋白质消化成较小的肽段。
3、液相色谱分离(Liquid Chromatography, LC)
消化后的肽段通过液相色谱进行进一步的分离以减少复杂性。
4、质谱分析
肽段经过色谱分离后将被送入质谱仪进行分析,质谱仪可以测量肽段的质量到电荷比(m/z),生成一个质谱图。
5、肽段指纹和碎片图谱
质谱仪不仅可以测量肽段的质量,还可以对选定的肽段进行进一步分解,得到更详细的碎片图谱(MS/MS数据)。
6、数据库搜索
将质谱数据与蛋白质数据库进行比对,软件会根据肽段的质量和碎片图谱信息寻找最匹配的蛋白质或肽段序列,常用的软件有Mascot、SEQUEST和MaxQuant等。
7、生物信息学分析
数据库搜索结果通常需要进一步分析,比如评估鉴定的置信度、定量比较(如果进行定量蛋白质组学分析)以及功能注释等。
8、验证
通过西方印迹(Western Blot)、免疫组化或其他生物学实验方法来验证质谱分析的准确性。
图1蛋白质组学的应用
来源:稚初科幻科学