摘要:测序质谱是一种分析策略,通常用于解码蛋白质或肽段的氨基酸序列。它利用质谱技术,特别是串联质谱(也称为MS/MS或二级质谱)来获取关于目标分子序列的信息。
测序质谱是一种分析策略,通常用于解码蛋白质或肽段的氨基酸序列。它利用质谱技术,特别是串联质谱(也称为MS/MS或二级质谱)来获取关于目标分子序列的信息。
基本过程和概念:
1、样品准备
蛋白质样本通常首先被消化,使用如胰蛋白酶这样的酶,产生一系列的小肽段。
2、离子化
肽段被引入质谱仪并被离子化,最常用的方法是电喷雾离子化(ESI)或基质辅助激光解吸/离子化(MALDI)。
3、肽段选择
在MS/MS实验中,选择一个特定的前体离子(即特定的肽段)进行进一步的分裂。
4、碎片化
选定的肽段在质谱仪的碰撞细胞中被分裂,产生一系列的碎片离子。
5、检测碎片
碎片离子被检测并生成一个MS/MS谱。这个谱可以被用来推断原始肽段的氨基酸序列。
6、数据解析
软件工具,如Mascot、Sequest或MaxQuant,被用来匹配MS/MS数据与已知的蛋白质数据库,从而鉴定肽段和蛋白质。
7、校验
由于自动鉴定可能产生假阳性结果,通常需要进行后续的数据校验,例如使用假发现率(FDR)估计。
来源:天才科学家