摘要：细菌内毒素作为影响药品安全性的核心风险因素，其检测与质量控制体系覆盖药品研发、生产、流通及临床应用等全生命周期管理环节。目前，凝胶检测技术和光度检测技术是应用最广泛的检测手段。药典标准体系对该检测项目均作出系统性规范：《中国药典》四部通则 1143 细菌内毒素

细菌内毒素作为影响药品安全性的核心风险因素，其检测与质量控制体系覆盖药品研发、生产、流通及临床应用等全生命周期管理环节。目前，凝胶检测技术和光度检测技术是应用最广泛的检测手段。药典标准体系对该检测项目均作出系统性规范：《中国药典》四部通则 1143 细菌内毒素检查法、9251细菌内毒素检查法应用指导原则、美国药典USP-NF2025 Bacterial Endotoxins Test, BET、 Guidelines on the Endotoxins Test。

细菌内毒素检测方法分析

凝胶检测技术基于鲎试剂与内毒素的凝集反应，通过观察凝胶是否形成来判断内毒素的存在，属于定性或半定量检测方法。其结果判断依赖肉眼观察和主观经验，容易出现误判；且检测为一次性操作，无法重复进行，结果需手工记录，存在数据丢失的风险。

光度检测技术通过内毒素与鲎试剂反应产生的浊度或吸光度变化，借助标准曲线实现内毒素含量的定量检测。按原理可分为动态浊度法、终点浊度法、动态显色法和终点显色法。其最高灵敏度达0.005EU/ml，相较于凝胶法（0.06EU/ml），同种样品的稀释倍数至少可扩大 10 倍。此外，该技术借助酶标仪软件自动计算，能保证检测准确性；原始数据可保存且支持审计追踪，不可修改或删除，确保真实完整。

对于部分使用凝胶检测技术无法排除干扰的样品，可以尝试使用光度检测技术建立细菌内毒素检测方法。

案列分析

接下来以光度检测技术中的动态浊度法为例，介绍对细菌内毒素方法学的研究。

➤限值L的确定

一般通过公式L=K/M确定，但需满足各国药典指导原则对各品种细菌内毒素限值的规定。

➤选择标准曲线（确定λ）

➤最大有效稀释倍数的确定

根据公式MVD=CL/λ，得出最大有效稀释倍数。

➤干扰初筛试验

初筛选择3个样品浓度1/4MVD、1/2MVD、MVD进行初步筛选。

为保证方法的稳定性及重现性应选择最接近100%回收率的浓度进行干扰实验。

➤正式干扰试验

根据干扰初筛试验结果确定浓度进行干扰实验，使用酶标仪自动计算软件得出统计结果：

如有可能，需稀释至≤1/2MVD倍进行检测（保留1个安全系数）

细菌内毒素检测是药品生产与研发过程中不可或缺的核心环节，直接关系到药品的安全性与有效性。凝胶检测技术虽在特定场景有一定价值，但对药企而言，光度检测技术能长期监测内毒素数据、绘趋势图，助于发现生产波动、提前风险评估干预，避免产品召回、降低成本；对研发人员，可实时监控新药各阶段内毒素水平，优化工艺、确保其可控，加速研发、提高成功率，能满足药品生产和研发全流程质量控制需求。

来源：东升哥健康说