摘要：产品活性：D-Luciferin 是荧光素酶 (Luc) 的天然底物，对萤火虫产生典型的黄绿光进行催化。该反应产生的 560 nm 化学发光在几秒钟内达到峰值，当底物荧光素过量时，光输出与荧光素酶浓度成正比。荧光素酶 (luc) 基因是研究和活性分子筛选的常用

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品牌：MedChemExpress (MCE)

CAS：115144-35-9

中文名称：D-萤光素钾盐

Synonyms：D-荧光素钾盐; D-(--Luciferin potassium; Firefly luciferin potassium; Beetle Luciferin potassium

纯度：99.97%

存储条件：4°C，密封保存，避光防潮 *溶剂中：-80°C，2年；-20°C，1年（密封保存，避光防潮）

运输条件：美国大陆的室温；其他地方可能有所不同。

产品活性：D-Luciferin 是荧光素酶 (Luc) 的天然底物，对萤火虫产生典型的黄绿光进行催化。该反应产生的 560 nm 化学发光在几秒钟内达到峰值，当底物荧光素过量时，光输出与荧光素酶浓度成正比。荧光素酶 (luc) 基因是研究和活性分子筛选的常用报告基因。化学发光技术实际上是无背景的，使得 luc 报告基因成为检测低水平基因表达的理想选择。在标准荧光计数仪中可以可靠地测量到 0.02 pg 的荧光素酶。除了用于基因表达的外，荧光素酶还用于 ATP 的检测。MCE提供萤火虫荧光素酶 (HY-P1004) 、荧光素游离酸 (HY-12591A) 及其水溶性钠盐 (HY-12591) 和钾盐 (HY-12591B) 。

生物活性：D-荧光素 (D-(-)-Luciferin) potassium 是荧光素酶的底物，可催化生物发光昆虫产生光[1]。 体外 D-荧光素是荧光素酶 (Luc) 的天然底物，可催化萤火虫典型黄绿光的产生。本综述涵盖了合成D-萤光素及其衍生物或类似物，它们是来自美国萤火虫 Photinus pyralis 的萤光素酶的底物或抑制剂，这种酶更常用于体外和光学成像技术[1].
D-萤光素在 PC3M-Luc 细胞裂解物中显示出测量的 Km 降低，Km 为 34 μM[ 2]。 体内：生物发光成像 (BLI) 使用萤火虫荧光素酶 (Fluc) 作为报告基因，D-荧光素作为底物，是目前应用最广泛的技术。将总信号强度与 D-荧光素注射后的时间作图，以生成时间-强度曲线。除了峰值信号外，D-荧光素注射后固定时间点（5、10、15 和 20 分钟）的信号被确定为峰值信号的替代信号。给定时间-强度曲线中的信号针对曲线中的峰值信号进行归一化，以表示 D-荧光素注射后的时间变化模式[3]。
注入 10 μL每克体重的 D-萤光素（腹膜内或静脉内）储备液：标准 150 mg/kg 注射的 20 g 小鼠通常约 200 μL。
解冻 D-萤光素（钾盐或钠盐）室温并溶解在 dPBS（不含钙或镁）中，最终浓度为 15 mg/mL。通过 5-10 mL 的无菌 H2O 预湿 0.22 μm 过滤器并丢弃水。通过准备好的 0.22 μm 注射器过滤器对 D-荧光素溶液进行消毒。

体外：1. 操作前注意事项a) D-Luciferin 在 100 mM 的水性缓冲液 (pH 6.1-6.5) 中易于溶解。储备溶液可在不含 ATP 的水中制成，并储存在 -20℃ 的温度下，以防光线照射。游离酸必须用适当的碱中和以溶解。在较高的 pH 值下，荧光素经历碱催化的脱氢脲醛生成，以及外消旋成L-异构体。b) D-Luciferin 可用于任何现有的报告基因检测或 ATP 检测系统。c) 如果检测 ATP，需要戴手套和使用不含 ATP 的容器，尽量减少所有可能的 ATP 污染源。只使用无菌的不含 ATP 的水和试剂。所有试剂制剂使用蒸压水。2. 实验操作此说明仅提供实验参考，具体实验方法根据您的具体实验进行更改。2.1 体外成像实验示例a) 在无菌水中制备100 mM (100-200X) 荧光素储备溶液 拌匀。立即使用或一次性等份使用，并在 -20℃ 下储存，避免冻融循环，避免暴露在阳光下。b) 在预热过的组织培养液中配制 0.5-1 mM D-Luciferin 工作液c) 除去细胞中的培养基。d) 在细胞中加入 D-Luciferin 工作液，成像前 37℃ 孵育细胞 5-10 分钟。2.2 体内成像实验示例a) 在 DPBS 中制备 15 mg/mL 荧光素储备溶液，不含 Mg2+ 和 Ca2+ 拌匀。b) 过滤器通过 0.2μm 过滤器对溶液进行灭菌。立即使用，或一次性等份使用，并在 -20℃ 下储存，避免冻融循环，避免暴露在阳光下。c) 成像前 10-15 分钟，以 150 mg/kg (或 10 μL/g 荧光素储备溶液) 的动物体重腹腔注射 D-Luciferin。注：应为每个动物模型进行 D-Luciferin 动力学研究，以确定峰值信号时间。2.3 基因检测实验示例a) 在无菌水中制备100 mM 荧光素储备溶液。立即使用，或一次性等份使用，并在 -20℃ 下储存，避免冻融循环，避免暴露在阳光下。b) 在 25 mM tricine 缓冲液 (pH 7.8) 中制备含有 3 mM ATP、1 mM DTT 和 15 mM MgSO4 的 1 mM D-Luciferin 工作溶液。c) 用移液管将 5-10 μL 细胞裂解液移到微孔板中。使用不含裂解物的裂解试剂或缓冲液作为空白对照。d) 根据说明，使用荧光素工作溶液为光度计注入底部。e) 立即注入 200 μL D-Luciferin工作溶液，结合时间为10秒。 MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。

体内：生物发光成像 (BLI) 使用萤火虫荧光素酶 (Fluc) 作为报告基因，D-荧光素作为底物，是目前应用最广泛的技术。将总信号强度与注射 D-荧光素后的时间作图，以生成时间-强度曲线。除了峰值信号之外，注射 D-荧光素后固定时间点 (5、10、15 和 20 分钟) 的信号也被确定为峰值信号的替代。给定时间-强度曲线中的信号根据曲线中的峰值信号进行归一化，以表示注射 D-荧光素后的时间变化模式[3]。每克体重注射 10 μL D-荧光素 (腹膜内或静脉内) 原液：标准 150 mg/kg 注射液，20 克小鼠通常注射约 200 μL。在室温下解冻 D-荧光素（钾盐或钠盐），并溶解在 dPBS（不含钙或镁）中，最终浓度为 15 mg/mL。通过 5-10 mL 无菌 H2O 预湿 0.22 μm 过滤器并弃水。通过准备好的 0.22 μm 注射器过滤器对 D-荧光素溶液进行灭菌。MCE 尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

动物实验：小鼠[2] 在接种 HCT116-Luc 细胞后 3、5、7、10、12、14、19、21、24 和 28 天，使用冷却电荷耦合器件摄像系统 (IVIS 成像系统 100) 进行体内 BLI。小鼠皮下注射 100 μL 磷酸盐缓冲盐水中的 75 mg/kg D-荧光素。注射后 5 分钟开始，以每分钟一张的速度连续获取曝光时间为 1 秒的背部发光图像，直至注射 D-荧光素后 20 分钟。由于光发射的时间过程延长，数据采集持续到第 3 天或第 5 天的注射后 40 分钟以及第 7 天的 25 分钟。Binning 为 4，视野为 15 厘米。MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。

参考文献：

[1]. Giuseppe Meroni, et al. D-Luciferin, derivatives and analogues: synthesis and in vitro/in vivo luciferase-catalyzed bioluminescent activity. ARKIVOC 2009 (i) 265-288.
[2]. Inoue Y, et al. Timing of imaging after d-luciferin injection affects the longitudinal assessment of tumor growthusing in vivo bioluminescence imaging. Int J Biomed Imaging. 2010;2010:471408.
[3]. Rajesh Shinde, et al. Luciferin derivatives for enhanced in vitro and in vivo bioluminescence assays. Biochemistry. 2006 Sep 19;45(37):11103-12.

详情参考：https://www.medchemexpress.cn/d-luciferin-potassium.html

来源：科学荣耀