摘要：胰高血糖素样肽-1(GLP-1)受体激动剂的出现改变了2型糖尿病的治疗方式，揭示了基于肠促胰岛素的疗法的多样作用。近年来，GLP-1类多肽药物（如司美格鲁肽和替尔泊肽）作为减肥药获批上市，使其作用从血糖控制扩展到了肥胖治疗。GLP-1通常通过固相多肽合成法(S

胰高血糖素样肽-1(GLP-1)受体激动剂的出现改变了2型糖尿病的治疗方式，揭示了基于肠促胰岛素的疗法的多样作用。近年来，GLP-1类多肽药物（如司美格鲁肽和替尔泊肽）作为减肥药获批上市，使其作用从血糖控制扩展到了肥胖治疗。GLP-1通常通过固相多肽合成法(SPPS)制成——尤其是在研发期间。不过，由于这类多肽药物的长度和理化特性，让合成变得复杂又耗时。合成工艺过于复杂通常会成为药物开发周期中的瓶颈问题，亟需开发创新解决方案。

本文介绍了我们在长肽固相多肽合成(SPPS)方面取得的重大进展，甚至包括攻克最复杂的多肽合成任务。我们使用先进的Symphony® X多肽合成仪，可自动运行，灵活且平行进行固相多肽合成，同时评测3种树脂和2种偶联试剂在合成利司那肽、普兰林肽和一种GLP-1/胰高血糖素受体(GluR)双激动剂中的效果。

方法与分析

GLP-1激动剂（表1）合成采用Symphony X多肽合成仪，Fmoc法SPPS，25 µmol规模。利用Symphony X的平行合成能力，同时测试3种树脂和2种偶联试剂。测试树脂包括：

R Ram Tentagel® 树脂(0.19 mmol/g)

Rink Amide ChemMatrix® 树脂(0.55 mmol/g)

Rink Amide MBHA低载量树脂(0.22 mmol/g)

结果

在室温和HCTU或COMU偶联试剂的搭配下，Rink Amide ChemMatrix树脂合成3种肽都具有最佳的粗品纯度，证明PEG类树脂在长肽合成上具有优势。

利司那肽的最高纯度来自COMU试剂（表1）。而对于GLP-1/GluR双激动剂（表2和图1）和普兰林肽（表3和图2），最佳结果来自HCTU。HCTU和COMU都是高活性的偶联试剂，1 min偶联反应即可带来高纯度肽。

结论

1.仅约2天时间，就成功地平行测试多个反应参数，完成GLP-1受体激动剂的高通量优化，获得宝贵的合成信息。

2.在GLP-1激动剂的合成中，基于聚乙二醇(PEG)的ChemMatrix树脂可达到最佳粗品纯度。

3.HCTU和COMU是高活性偶联试剂，可通过2次1 min偶联反应带来高纯度多肽。

4.利司那肽合成的最佳粗品纯度来自Rink Amide ChemMatrix树脂、COMU偶联试剂、2 x 1 min偶联反应时间的搭配。

5.普兰林肽和GLP-1/GluR双激动剂合成的最佳粗品纯度来自Rink Amide ChemMatrix树脂、HCTU偶联试剂、2 x 1 min偶联反应时间的搭配。

6.下一步涉及GLP-1/GluR双激动剂的ivDde去除和Lys14延伸优化，可合成司美格鲁肽。

Symphony X 多肽合成仪特点

1.24个独立通道的平行反应器(RV)，可同时在多个反应器上独立进行不同规模、序列和方法的合成反应

2.12个反应器可作预活化位，提高氨基酸偶联效率

3.在混合时实时紫外监测反应溶液而不是废液，以控制脱保护时间并尽量减少废液，获得更好的纯度和产率

4.红外加热，可在短时间内加热至90℃，提高反应速率

5.Single Shot™液技术，无需润洗，几乎没有死体积，节约珍贵试剂

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来源：小猫说科学