「干冰」连接特异性UbiTest-磁珠管洗脱试剂盒，真正证明多泛素化

摘要：UbiTest试剂盒用于确定目标蛋白是否被多泛素化。这一强大的平台改进了研究蛋白质泛素化最常用的方法：免疫沉淀和Western blot分析。然而，在免疫印迹步骤中，底物抗体常常与底物的多泛素化形式相互作用不同。这是由于表位遮蔽、亲和力降低或选择性变化所导致的

UbiTest试剂盒用于确定目标蛋白是否被多泛素化。这一强大的平台改进了研究蛋白质泛素化最常用的方法：免疫沉淀和Western blot分析。然而，在免疫印迹步骤中，底物抗体常常与底物的多泛素化形式相互作用不同。这是由于表位遮蔽、亲和力降低或选择性变化所导致的。一种更明确的证明蛋白质泛素化的方法是，在免疫印迹分析之前，将免疫沉淀与广谱去泛素化酶（DUB）消化相结合。经过DUB处理后，目标蛋白（POI）的信号增加，这清楚地表明该蛋白已被泛素化，即使在未处理的样本中没有明显的反应性也是如此。为了避免由于POI免疫反应性变化而可能产生的问题，UbiTest检测利用TUBEs来下拉多泛素化蛋白。TUBEs（串联泛素结合实体）是经过工程改造的串联泛素结合结构域，其对四泛素的解离常数在纳摩尔范围内。TUBE1已被证明能够结合所有8种连接类型。

确定目标蛋白上多泛素化的连接类型是具有挑战性的。传统方法要么通过质谱（MS），要么使用连接特异性抗体进行Western blot。LifeSensors开发了一种更明确的方法，通过在免疫印迹分析之前使用连接特异性DUB来证明蛋白质的多泛素化连接类型。经过K48/K63特异性DUB处理后，未修饰POI对应的条带信号增加，清楚地表明该蛋白被K48/K63多泛素化。