摘要：酵母单杂交技术是由酵母双杂交GAL4系统衍生发展而来，是一种在酵母细胞内分析与鉴定转录因子与DNA顺式作用元件相互结合的有效方法。简单来说，将已知特定顺式元件构建到最基本启动子（minimal promoter，Pmin）的上游，报告基因连接在启动子下游，构成

背景说明

酵母单杂交技术是由酵母双杂交GAL4系统衍生发展而来，是一种在酵母细胞内分析与鉴定转录因子与DNA顺式作用元件相互结合的有效方法。简单来说，将已知特定顺式元件构建到最基本启动子（minimal promoter，Pmin）的上游，报告基因连接在启动子下游，构成包含target DNA Element（bait sequence）的诱饵DNA。将转录因子构建到可以表达AD激活结构域的载体上，表达形成融合猎物蛋白（prey）。如果顺式作用元件和转录因子结合，会激活Pmin启动子，从而促使报告基因表达。因此，可以通过检测报告基因表达与否来判断顺式作用元件与转录因子是否发生互作。

表 我司酵母单杂系统

图 原始诱饵载体pAbAi

图 原始猎物载体pGADT7

图 原始猎物诱饵载体pHIS2

服务流程

客户在线下单—订单/实验材料确认—CloneCAD实验设计—酵母单杂载体构建

服务内容及说明

适用场景

1、确定已知DNA-蛋白质之间是否存在相互作用；

2、分离结合于目的顺式调控元件或其他短DNA结合位点蛋白的新基因；

3、定位已经证实的具有相互作用的DNA结合蛋白的DNA结合结构域，以及准确定位与蛋白结合的核酸序列。

优势特点

1、采用我司已被授权的国际PCT专利技术（专利号：US 10,144,936 B2）来进行载体的构建，且该组装为无缝组装；

2、载体资源丰富，同时支持个性化定制载体；

3、实验结果可靠、图片美观；

4、可与我司酵母实验进行衔接，整个实验可以畅通且快速地完成。

实验周期

5-10个工作日

样品接收标准

客户下单及项目信息填写：

在我司官网/进行注册或登录，请客户按照提示填写项目名称、选择项目类型、项目所需要的具体信息，价格由系统自动计算。

实验信息：

在实验开始、结题关键节点系统会自动发送短信到申请人手机进行告知，实验过程中客户可以随时登录客户管理系统查看项目实时进展情况。实验结题后，实验报告、检测结果可在线查看，并永久保留。重组载体在实验结束后免费为客户保存半年后销毁。客户邮寄的模板在实验结束后免费保存1个月后销毁。

结题标准：

目的片段构建至目的载体上（俗称“构建成功”）。

实验交付内容：

1、重组载体的全序列信息和注释信息；

2、重组载体的酶切图谱；

3、重组载体的测序结果；

4、重组载体：一份质粒、一份大肠杆菌菌液（25%甘油菌）。

文献举例

OsbZIP7e2直接与水稻中的OsPsbS1启动子结合。(a)来自日本晴的截断OsPsbS1启动子片段示意图，转录起始位点表示为+1。(b)酵母单杂实验显示OsbZIP72结合位点位于启动子片段A_2区域。将各种截短的启动子片段分别克隆到pAbAi载体中，并将OsbZIP72的全长编码序列（CDS）融合到pGADT7载体上。在SD/-Leu + AbA1000的筛选培养基中检测相互作用。pGADT7-53和pAbAi-p53用作阳性对照，而pGADT7和pAbAi-p53用作阴性对照。

参考文献：

Fu X, Liu C, Li Y, et al., 2021. The coordination of OsbZIP72 and OsMYBS2 with reverse roles regulates the transcription of OsPsbS1 in rice. New Phytol, 229(1):370-387.

来源：美食女儿国