摘要:现在正是准备国自然基金课题的时候,有很多小伙伴还没有思路,该怎么办呢?可以看看这个40分多分的自噬、成纤维细胞国自然课题设计思路,具体情况如下:
现在正是准备国自然基金课题的时候,有很多小伙伴还没有思路,该怎么办呢?可以看看这个40分多分的自噬、成纤维细胞国自然课题设计思路,具体情况如下:
STX11与SNAP25相互作用,形成STX11-SNAP25复合物,阻断PI3K/AKT/mTOR通路,促进肺成纤维细胞的自噬,从而抑制肺纤维化的发生发展
课题内容组成部分的拆分:
一、STX11的选择与确定二、STX11的体内外功能研究三、STX11与SNAP25形成复合物调控PI3K/AKT/mTOR/自噬的分子机制研究一、STX11的选择与确定
前期工作(不用花钱):
1、生信数据挖掘(差异分析)
2、eQTL、pQTL分析 (参考文献没有的)
预实验验证:
3、qRT-PCR、Western blot
4、STX11沉默后促进成纤维细胞的激活(预实验)
二、STX11的体内外功能研究1、细胞水平:构建成纤维细胞模型,验证STX11的过表达或敲低对肺成纤维细胞的活化和增殖的影响;验证STX11的过表达通过促进自噬来减弱成纤维细胞的活化,并且通过挽救实验验证。2、动物水平:构建肺纤维化动物模型,验证STX11的过表达或敲低对肺纤维化进程的影响。三、STX11与SNAP25形成复合物调控PI3K/AKT/mTOR/自噬的分子机制前期工作:探索STX11可能相关的作用机制(生信分析)1、将STX11分为高、低表达组,进行差异分析,然后做GO、KEGG富集分析、GSEA分析,探索STX11调控的功能或者明星通路2、使用蛋白预测的方法,探索与STX11调控相关的靶点基因1、分别过表达、敲低STX11,观察SNAP25mRNA、蛋白水平的变化2、分别过表达、敲低SNAP25 ,观察STX11 mRNA、蛋白水平的变化3、验证 STX11 和SNAP25 是否直接或间接形成复合物(Co-IP)4、验证 STX11 与SNAP25 是否在细胞内形成复合物(BiFC或共定位实验)5、验证 SNAP25 对肺成纤维细胞活化的抑制作用(细胞水平)6、验证STX11是否通过上调SNAP25抑制成纤维细胞活化(细胞水平)7、构建肺纤维化动物模型,验证 STX11 的过表达或敲低对肺纤维化进程的影响(动物水平)8、验证 STX11/SNAP25 对PI3K/AKT/mTOR 通路的抑制作用9、验证 STX11-SNAP25 促进肺成纤维细胞自噬10、验证 STX11-SNAP25 复合物抑制成纤维细胞活化(细胞水平)11、构建肺纤维化动物模型,验证 STX11-SNAP25 抑制肺纤维化(动物水平)40多分的参考文献:
本文只分享思路,剩下的细节问题需要自己摸索。
来源:币天科学社区
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