摘要:细胞与细胞外基质(ECM)的黏附对于许多贴壁细胞的生存和增殖至关重要。细胞失去与ECM的黏附或黏附不适当所导致的凋亡被称为“失巢凋亡”(anoikis)。失巢凋亡一词来源于希腊语,意为“无家可归”,它参与了组织更新和细胞稳态的生理过程。
细胞与细胞外基质(ECM)的黏附对于许多贴壁细胞的生存和增殖至关重要。细胞失去与ECM的黏附或黏附不适当所导致的凋亡被称为“失巢凋亡”(anoikis)。失巢凋亡一词来源于希腊语,意为“无家可归”,它参与了组织更新和细胞稳态的生理过程。
癌细胞发展和生长的一个共同特征是转化细胞能够在“无锚定”或“球体”生长条件下存活。这种对失巢凋亡的抵抗已被证明与细胞稳态的丧失、癌症生长和转移有关。抑制细胞在ECM上的黏附、扩散和生长会阻碍细胞愈合过程,因此它可能是一个潜在的治疗靶点。防止失巢凋亡并增强细胞黏附和扩散是细胞移植技术开发的主要目标,包括祖细胞的治疗应用。进一步研究旨在控制失巢凋亡抵抗的分子机制,将有助于定义治疗多种人类恶性肿瘤的有效疗法。
CytoSelect™ 24孔失巢凋亡试剂盒提供比色法和荧光法格式,用于测量无锚定生长并监测失巢凋亡诱导的细胞死亡。试剂盒包含足够的试剂,可在涂有聚羟乙基甲基丙烯酸酯(Poly-Hema)的24孔板中检测24个样本。活细胞通过MTT或Calcein AM检测。细胞死亡通过乙锭均聚物(EthD-1)检测。
艾美捷CytoSelect 24孔板细胞失巢凋亡分析试剂盒(比色法/荧光法)(#CBA-080)测定原理:
细胞在聚羟乙基甲基丙烯酸酯(Poly-Hema)涂层板或对照板中培养。通过MTT或Calcein AM测定细胞活性。通过乙锭均聚物(EthD-1)测定失巢凋亡诱导的细胞死亡。EthD-1是检测死亡细胞的极佳标记物。EthD-1是一种红色荧光染料,只能穿透受损的细胞膜。EthD-1在结合单链DNA、双链DNA、RNA、寡核苷酸和三链DNA时,荧光强度会增强40倍。由于这些染料在与细胞相互作用之前几乎不具有荧光,因此背景荧光水平非常低。
相关产品:
1. CBA-081:CytoSelect™ 96孔失巢凋亡试剂盒
2. CBA-230:细胞衰老检测试剂盒(SA-β-半乳糖苷酶染色)
3. CBA-231:96孔细胞衰老测定试剂盒(SA β-半乳糖苷酶活性)
4. CBA-232:定量细胞衰老测定试剂盒(SA β-半乳糖苷酶)
5. CBA-240:CytoSelect™细胞活性和细胞毒性测定试剂盒
CytoSelect 24孔板细胞失巢凋亡分析试剂盒组成(室温运输):
1. 无锚定抗性板(部件编号108001):一个24孔聚羟乙基甲基丙烯酸酯(Poly-Hema)涂层板。
2. Calcein AM(500倍)(部件编号108002):一瓶——50微升,溶于DMSO。
3. 乙锭均聚物(EthD-1)(500倍)(部件编号108003):一瓶——50微升。
4. 洗涤剂溶液(部件编号108004):一瓶——25.0毫升。
5. MTT溶液(部件编号113502):三个试管——每个1.0毫升。
未提供的材料:
1. 用于测定失巢凋亡的细胞
2. 细胞培养基
3. 倒置荧光/光学显微镜
4. 能够读取Calcein AM(485纳米/515纳米)和EthD-1(525纳米/590纳米)荧光的荧光光度计
储存条件:
将Calcein AM和乙锭均聚物储存于-20摄氏度。将所有其他组分储存于4摄氏度。
结果示例:
下图展示了使用CytoSelect™ 24孔失巢凋亡试剂盒的典型结果。以下数据仅供参考,不应用于解释实际结果。
图:人包皮成纤维细胞BJ-TERT细胞的失巢凋亡测定。将BJ-TERT细胞以每孔50,000个细胞的密度接种到组织培养对照板或聚羟乙基甲基丙烯酸酯(Poly-Hema)涂层板中。细胞培养24小时后,通过MTT和Calcein AM测定细胞活性,而类似失巢凋亡的细胞死亡则用EthD-1染色。
CytoSelect 24孔板细胞失巢凋亡分析试剂盒文献参考:
1. Bates RC, Buret A, van Helden DF, Horton MA, Burns GF. (1994) J Cell Biol 125, 403-415.
2. Frisch SM, Francis H. (1994) J Cell Biol 124, 619-626.
3. Frisch SM, Screaton RA. (2001) Curr Opin Cell Biol 13, 555-562.
4. Meredith JE, Jr Fazeli B, Schwartz MA. (1993) Mol Biol Cell 4, 953-961.
5. Rak J, Mitsuhashi Y, Erdos V, Huang SN, Filmus J, Kerbel RS. (1995) J Cell Biol 131, 1587-1598.
来源:老妖聊科学