摘要:RNA(核糖核酸)的修饰在RNA分子的功能、完整性、代谢和生物合成中起着至关重要的作用。目前已发现超过100种RNA修饰,其中大多数发生在转运RNA(tRNA)中,但它们也可以在核糖体RNA(rRNA)、小核RNA(snRNA)、信使RNA(mRNA)和长非编
RNA(核糖核酸)的修饰在RNA分子的功能、完整性、代谢和生物合成中起着至关重要的作用。目前已发现超过100种RNA修饰,其中大多数发生在转运RNA(tRNA)中,但它们也可以在核糖体RNA(rRNA)、小核RNA(snRNA)、信使RNA(mRNA)和长非编码RNA(ncRNA)中找到。修饰核苷的尿液排泄与多种癌症、艾滋病和其他恶性疾病状态有关。
1-甲基腺苷(m1A)是一种显著的可逆转录后RNA修饰,影响tRNA和rRNA的功能和结构。1-甲基腺苷出现在tRNA的第9、14和58位,其中第58位(m1A58)对tRNA的稳定化很重要。甲基转移酶催化将甲基添加到腺苷碱基结构的第一个氮原子上,从而使分子带上正电荷。该反应是可逆的,去甲基化酶如ALKBH3可以逆转这一过程。1-甲基腺苷可以影响核糖体的生物合成、细菌中的抗生素抗性、tRNA对环境压力的反应,并干扰沃森-克里克碱基配对,最终影响逆转录和蛋白质翻译。
癌症、类风湿性关节炎和艾滋病患者的尿液样本中均显示出高水平的m1A,这支持了其作为功能性检测生物标志物的作用。在应激条件下,已检测到血清中1-甲基腺苷水平升高。最近关于1-甲基腺苷的研究正在揭示其新的作用和机制。尽管DNA中的m1A被认为是一种导致基因组突变的损伤形式,因此需要修复,但内源性酶在RNA中增殖m1A修饰。第9位的m1A(m1A9)已知可以稳定tRNA中的典型三叶草结构。此外,所有真核生物类型的tRNA中都存在第58位的m1A(m1A58),这可能意味着它对分子结构和稳定性至关重要。尽管1-甲基腺苷已被鉴定为早期恶性疾病的标志物,但其作为修饰核苷的完整作用尚未被阐明。
艾美捷1-甲基腺苷(m1A)ELISA试剂盒(#MET-5099)是一种竞争性酶免疫分析方法,用于快速检测和定量尿液、血清或血浆样本中的1-甲基腺苷。通过将未知样本中的1-甲基腺苷吸光度与已知1-甲基腺苷标准曲线的吸光度进行比较,来确定未知样本中1-甲基腺苷的含量。该试剂盒对1-甲基腺苷的检测灵敏度约为2纳克/毫升。每套试剂盒提供的试剂足以进行多达96次测定,包括标准曲线和未知样本。
测定原理:
1-甲基腺苷(m1A)ELISA试剂盒是一种竞争性ELISA,用于定量测量1-甲基腺苷(m1A)。首先将未知的1-甲基腺苷样本或1-甲基腺苷标准品加入预先吸附了1-甲基腺苷-牛血清白蛋白(BSA)偶联物的微孔板中。经过短暂孵育后,加入抗1-甲基腺苷单克隆抗体,随后加入辣根过氧化物酶(HRP)偶联的二抗。通过与预设的1-甲基腺苷标准曲线进行比较,确定未知样本中的1-甲基腺苷含量。
相关产品:
1. MET-5097:N6-甲基腺苷(m6A)ELISA试剂盒
2. STA-320:OxiSelect™氧化DNA损伤ELISA试剂盒(8-OHdG定量)
3. STA-321:OxiSelect™ DNA双链断裂(DSB)染色试剂盒
4. STA-322:OxiSelect™紫外线诱导DNA损伤ELISA试剂盒(CPD定量)
5. STA-323:OxiSelect™紫外线诱导DNA损伤ELISA试剂盒(6-4PP定量)
1-甲基腺苷(m1A)ELISA试剂盒组成:
盒子1(室温运输)
1. 96孔蛋白结合板(编号231001):一个96孔条板。
2. 抗1-甲基腺苷抗体(编号50991C):一个10微升装的抗1-甲基腺苷抗体小瓶。
3. 二抗,HRP偶联物(1000倍)(编号230003):一个20微升装的小瓶。
4. 测定稀释液(编号310804):一个50毫升瓶。
5. 10倍洗涤缓冲液(编号310806):一个100毫升瓶。
6. 底物溶液(编号310807):一个12毫升琥珀色瓶。
7. 终止液(编号310808):一个12毫升瓶。
8. 1-甲基腺苷标准品(编号50992C):一个10微升装的5毫克/毫升1-甲基腺苷(溶于DMSO)小瓶。
盒子2(蓝冰运输)
1. 1-甲基腺苷偶联物(1000倍)(部件编号50993D):一个10微升装的1-甲基腺苷-BSA偶联物(溶于PBS)小瓶。
未提供的材料:
1. 1-甲基腺苷样本,如尿液、血清、血浆或从细胞或组织中提取的RNA
2. RNA提取试剂盒、核酸酶P1、碱性磷酸酶
3. pH 5.2的醋酸钠;pH 7.5的Tris缓冲液
4. 10 kDa分子量截止(MWCO)离心过滤器(例如Amicon Ultra 0.5毫升)
储存条件:
收到后,将抗1-甲基腺苷抗体和1-甲基腺苷标准品分装并储存于-20摄氏度,1-甲基腺苷偶联物(1000倍)储存于-80摄氏度,以避免反复冻融。将所有其他组分储存于4摄氏度。
结果示例:
下图展示了典型的1-甲基腺苷ELISA结果。以下数据仅供参考,不应用于解释实际结果。
图上:1-甲基腺苷ELISA标准曲线
图下:人尿液、血浆和血清中的1-甲基腺苷水平。根据测定协议说明测试未稀释的人类样本。
1-甲基腺苷(m1A)ELISA试剂盒文献参考:
1. Borek, E., et al. (1977) Cancer Res. 37: 3362-3366.
2. Chen, W., et al. (2016) Sci Rep. 6: 31080.
3. Davis, G.E., et al. (1977) Clin. Chem. 23: 1427-1435.
4. Dominissini, D., et al. (2016) Nature 530: 441-446.
5. Macon, J.B., et al. (1968) Biochemistry 7(10): 3453-3458.
6. Seidel, A., et al. (2006) Br. J. Cancer 94: 1726-1733.
来源:带盐人小布