摘要：2022年丹麦启动了一个旨在降低本土猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）流行率的项目。为了净化PRRS病毒，需要进行更多的RT-qPCR检测，这些检测需要用到多种样本材料，如处理液（Processing Fluid，PF）、舌尖液（Tongue Tip Fluid，

目的和意义

2022年丹麦启动了一个旨在降低本土猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）流行率的项目。为了净化PRRS病毒，需要进行更多的RT-qPCR检测，这些检测需要用到多种样本材料，如处理液（Processing Fluid，PF）、舌尖液（Tongue Tip Fluid，TTF）和口腔液（oral fluid，OF）等。该项目目的是开发经过验证的建议，指导如何最佳地采集、储存和运输用于检测PRRSV的不同样本，从而避免出现假阴性的检测结果。

材料与方法

通过向阴性样本材料中添加PRRSV-1细胞培养分离株，来研究储存温度和时间对口腔液（OF）和处理液（PF）中PRRSV RNA稳定性的影响。这些注入了病毒的材料在不同温度和时间条件下储存，最后通过RT-qPCR检测提取的病毒RNA，以监测不同过程的影响。

结 果

结果表明，在4°C、-20°C和-80°C下储存血清、口腔液（OF）和处理液（PF）长达30天，对RT-qPCR的Cq值影响较小。一轮冻融对Cq值影响也不大，但经过2-3轮反复冻融后对口腔液（OF）样品的负面影响更为明显。相比之下，在室温下储存仅一天就会导致所有样本的Cq值显著增加，这表明对PRRSV的检测能力受到了严重影响。

讨论和结论

正确处理PCR检测样本对于避免假阴性检测结果至关重要。根据本研究的结果，我们建议处理液（PF）和舌尖液（TTF）样品应在采样后立即冷冻至-20°C，然后在使用样本之前在温度4-8°C下解冻。此前，我们还发现在室温下储存血清会产生相对明显的负面影响，因此我们建议在采样后尽快将所有用于RT-qPCR的样品进行冷却。样品在运送到实验室的过程中也应保持冷链运输，如使用泡沫箱，添加冰袋等。

来源：倾听江村夜笛