摘要：在生命科学的广袤领域中，对人脂联素（ADPN）浓度的精准检测，犹如开启健康与疾病奥秘之门的钥匙，对于深入研究人体生理病理机制至关重要。人脂联素（ADPN）酶联免疫试剂盒，作为一款专业的科研工具，为科研人员提供了体外定量检测血清、血浆或其他相关生物液体中人脂联素

在生命科学的广袤领域中，对人脂联素（ADPN）浓度的精准检测，犹如开启健康与疾病奥秘之门的钥匙，对于深入研究人体生理病理机制至关重要。人脂联素（ADPN）酶联免疫试剂盒，作为一款专业的科研工具，为科研人员提供了体外定量检测血清、血浆或其他相关生物液体中人脂联素（ADPN）浓度的可靠方法。在使用这一强大工具前，详细了解其各项特性、操作流程及注意事项，是确保实验顺利进行并获取准确结果的关键。

一、卓越性能，助力科研探索

人脂联素（ADPN）酶联免疫试剂盒具备一系列令人瞩目的性能指标。其灵敏度高达 0.1 μg/mL，如同敏锐的 “探测器”，能够精准捕捉到极微量的人脂联素。特异性方面表现出色，对检测样本中的人脂联素具有高度识别能力，与类似物无明显交叉反应，确保了检测结果的准确性和可靠性。在重复性上，板内、板间变异系数均小于 10%，这一优异表现意味着无论在同一板内还是不同板间进行多次检测，都能得到稳定且一致的结果，为实验的可重复性提供了坚实保障。检测范围为 0.9375 μg/mL – 30 μg/mL，可满足不同科研场景下对人脂联素浓度检测的需求。需明确的是，该试剂盒仅用于科研，严禁用于临床诊断。

二、科学原理，构建检测基石

试剂盒采用双抗体夹心法这一科学原理。以抗人脂联素（ADPN）抗体包被酶标板，如同搭建起一个专门 “捕获” 人脂联素的精密平台。实验时，样品或标准品中的人脂联素（ADPN）会与包被抗体结合，接着加入辣根过氧化物酶标记的抗体，形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物。经过洗板，去除游离成分，加入显色底物 (TMB)。在辣根过氧化物酶的催化下，TMB 呈现蓝色，加入终止液后变为黄色。颜色的深浅与样品中的人脂联素（ADPN）浓度呈正相关，通过酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），即可精确计算出样品浓度。

三、精心配置，满足多样需求

试剂盒组成丰富且配置合理，充分满足实验需求。不同规格的微孔酶标板（96 孔为 12 孔 ×8 条，48 孔为 12 孔 ×4 条，可拆卸）为实验提供了灵活的反应场所。标准品（0.3mL*6 管）浓度从高到低依次为 30、15、7.5、3.75、1.875、0.9375 μg/mL，为绘制标准曲线提供了准确的浓度参考。样本稀释液、检测抗体 - HRP、20× 洗涤缓冲液、底物 A、底物 B、终止液等试剂，各司其职，协同助力实验顺利进行。此外，封板膜、使用说明书和自封袋等辅助物品，为实验操作提供了便利。

四、充分准备，确保实验无误

检测前的准备工作至关重要。需提前 60 分钟将试剂盒和样本从冰箱中取出，使其平衡至室温，为实验营造稳定的环境。从冰箱中取出的浓缩洗涤液若有结晶，属正常现象，放置室温轻摇均匀，待结晶完全溶解后，按 1：20 的比例用蒸馏水或去离子水稀释配置成工作浓度的洗涤液，未用完的需放回 4℃保存。

五、多样方法，适配不同样本

针对不同类型的样品，试剂盒提供了多种收集方法。血清样品需全血于室温放置 2 小时或 4℃过夜后，以 2000prm 转速离心 20 分钟取上清，且收集血液的试管应为一次性无内毒素试管。血浆样品推荐使用 EDTA 钠盐作为抗凝剂，样品采集后 30 分钟内以 2000prm 转速离心 15 分钟取上清，同时要避免使用溶血、高血脂样品。
组织匀浆需用预冷的 PBS (0.01M，pH = 7.4) 冲洗组织，去除残留血液，称重后剪碎。将剪碎的组织与对应体积的 PBS（一般按 1:9 的重量体积比，可根据实验调整），并加入蛋白酶抑制剂，放入玻璃匀浆器中，在冰上充分研磨。为进一步裂解组织细胞，可对匀浆液进行超声破碎或反复冻融。最后将匀浆液 5000prm 转速离心 5 - 10 分钟，取上清检测。
细胞提取液的制备，贴壁细胞用冷的 PBS 清洗，胰蛋白酶消化后，以 2000prm 转速离心 5 分钟收集细胞；悬浮细胞可直接离心收集。收集的细胞用冷的 PBS 洗涤 3 次，每 1 ×10⁶ 个细胞中加入 150 - 200 μLPBS 重悬，反复冻融使细胞破碎（含量低时可减少 PBS 体积）。将提取液以 2000prm 转速离心 10 分钟，取上清检测。
细胞培养上清或其他生物体液则以 2000prm 转速离心 20 分钟，除去杂质及细胞碎片，取上清检测。

六、注意事项，保障实验质量

样品收集后，若 1 周内检测可保存于 4℃，若不能及时检测，需按一次使用量分装，冻存于 - 20℃以下，且要避免反复冻融，溶血标本不宜进行此项检测。若样品中检测物浓度高于标准品最高值，需根据实际情况做适当倍数稀释，建议先做预实验拉梯度确定稀释倍数。使用化学裂解液制备样品可能导致 ELISA 测值出现偏差，某些重组蛋白可能与试剂盒中抗体不匹配而无法检测。

七、严谨操作，追求准确结果

实验操作需严格遵循步骤。计算并确定所需预包被板条数，取出放置在 96 孔框架内，剩余板条密封保存于 4ºC。试剂盒和样本在室温下（25 - 28ºC）平衡 60min 后，设置标准品孔、样本孔和空白孔。标准品孔加入不同浓度的标准品 50 μL，样本孔加入待测样本 50 μL（可适当稀释），空白孔加入样本稀释液 50 μL。
所有孔中加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体 100 μL，用封板膜封住反应孔，在 37℃水浴锅或恒温箱温育 45min。弃去液体，通过特定洗板步骤（每孔加满 350μL 洗涤液，静置 20s，甩去洗涤液，重复 5 次，也可用洗板机洗板）清洗。每孔加入底物 A、B 各 50 μL，37℃避光孵育 15min，最后每孔加入终止液 50 μL，15min 内在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。

八、精准计算，呈现可靠数据

实验结果计算需严谨对待。各标准品及样本若设复孔，应取其平均值计算。以标准品的浓度为纵坐标，O.D. 值为横坐标，绘出标准曲线（依据回归方程计算的 R² 值确定最佳方程式，R² 值越趋近于 1 越好）。通过样品的吸光度值和标准曲线（直线拟合或者 4 参数拟合）计算出样品的相应浓度，再乘以相应稀释倍数（未稀释则无需乘），即为样品实际浓度。

九、严格验证，品质值得信赖

该试剂盒在精密度、回收率和线性等方面经过严格验证。板内精密度通过低、中、高浓度样本在 1 块板子上检测 20 次评估，板间精密度通过在 3 块板子上检测 20 次评估，批内和批间变异系数均在合理范围内。回收率实验中，不同样本类型在添加已知浓度的 ADPN 后，得出了相应的回收率范围和平均回收率。线性实验通过对添加 ADPN 的样本进行不同倍数稀释，也得出了可靠的回收率数据。

十、安全警示，规范科研行为

使用本试剂盒时需注意安全。其中的终止液为稀硫酸，具有轻微腐蚀性，使用时应避免接触衣物或皮肤暴露部位。试剂盒使用完毕后，要妥善处理相关耗材，避免环境污染。
由于现有技术水平限制，产品可能存在质量技术风险，且并非所有内源性干扰因素都已去除。实验结果受多种因素影响，用户应严格按说明书操作，只使用试剂盒内提供的试剂，避免混用其他产品。在储存及温育过程中要避免试剂暴露在强光中，盖紧试剂瓶盖，防止蒸发和微生物污染。
刚开启的酶联板板孔中可能有少许水样物质，属正常现象，不影响实验结果。酶标板应在使用时从包装袋取出，勿提前取出。操作过程中试剂制备及酶标仪参数设置不当可能导致结果异常，实验前需仔细阅读说明书并调整好仪器。
相同人员操作也可能在两次独立实验中得到不同结果，为保证结果重现性，需控制实验每一步操作。试剂盒发货前虽经严格质检，但运输条件、实验设备差异等因素可能导致用户检测结果与出厂数据不一致，不同批次试剂盒间也可能存在差异。本试剂盒未与其他厂家同类试剂盒或不同方法检测同一目的物的产品对比，不排除检测结果不一致的情况。

来源：聪聪很可爱